адекватно

  • абстрактно
  • Основното
  • МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ
  • Животни и протокол за изследване.
  • Пробиотици.
  • Strave.
  • Напълняване и наддаване.
  • Плазмена глюкоза, инсулин, аминокиселини, урея и кортизол.
  • Инфузия и анализ на аминокиселини.
  • Анализ на факторите за иницииране на транслацията и общите убиквитинирани протеини.
  • Статистически анализ.
  • РЕЗУЛТАТИТЕ
  • Увеличаване на теглото и растеж.
  • Плазмена глюкоза, инсулин, кортизол, аминокиселини и обмен на протеини в цялото тяло.
  • Синтез на протеини на скелетните мускули, фактори за иницииране на транслацията и убиквитинирани протеини.
  • Корелации на плазмените левцини.
  • ДИСКУСИЯ
  • Терминологичен речник

абстрактно

Основното

За предотвратяване на загуба на тегло могат да се използват различни средства, включително анаболни лекарства и/или ентерално хранене (11). Целта на тези стратегии е да се поддържа анаболно състояние чрез стимулиране на PS и минимизиране на протеолизата. От гледна точка на скелетните мускули, тези подходи стимулират инициирането на транслация на протеин чрез mTOR, намаляват протеолитичната активност (особено убиквитин-медиирана протеолиза) или и двете. След това този клетъчен ефект би се превърнал в увеличаване на скоростта на фракционен синтез на скелетната мускулатура (FSR) и поддържане на нормален растеж и мускулна маса.

Ентералното хранене може да бъде ефективно за предотвратяване на мускулни отпадъци и ограничаване на растежа на IBD чрез увеличаване на медиирани от инсулин клетъчни сигнали, които инициират PS, или чрез директно увеличаване на наличността на хранителни вещества. Анаболните ефекти на повишените плазмени аминокиселини, по-специално левцин, са добре известни и са демонстрирани както при здрави (12, 13), така и при „септични“ прасенца (14). Неотдавнашно клинично проучване показа още, че хиперинсулинемията и ремисията на заболяването при възрастни с болестта на Crohn или улцерозен колит са свързани (15). Следователно, въпреки енергийния дефицит, е възможно да се поддържа растеж и PS с постоянно снабдяване с хранителни вещества.

По-рано показахме при същите прасенца, използвани в това проучване, че добавките с пробиотици увеличават PS в черния дроб и синтеза на албумин, но не влияят върху тежестта на заболяването или PS само в дебелото черво (16). Въз основа на неочаквано откритие на PS-стимулиран черен дроб, ние се фокусирахме върху изследването дали пробиотиците биха предизвикали подобен анаболен ефект в скелетните мускули, за да облекчат мускулните отпадъци, свързани с намален прием на храна и възпаление при IBD. Други са показали, че пробиотичните добавки са потенциална допълнителна терапия за IBD както при IBD при възрастни, така и при деца (17–19). Повечето клинични изпитвания на пробиотици обаче са фокусирани върху контрола на симптомите и индуцирането на ремисия, но не и върху хранителния статус.

Следователно, това проучване изследва ефекта от продължителния ентерален прием на храна с адекватен прием на макроелементи, 50% необходимост от макроелементи или 50% пробиотични добавки за остър колит. Използвахме подход на постоянно хранене, за да повишим концентрацията на инсулин и аминокиселини. Устойчивата стимулация на инсулин и медиирана от левцин клетъчна сигнализация се очаква да стимулира чистите анаболни клетъчни процеси. Следователно нашите хипотези бяха, че 1) поддържането на адекватен прием на хранителни вещества би предотвратило увреждане на растежа и ще поддържа нивата на PS мускулите и 2) прилагането на пробиотици няма да намали намаляването на мускулния растеж и PS в отговор на диетичните ограничения в модела на колит на прасенца.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Животни и протокол за изследване.

Пробиотици.

Прасенцата C-MRP са получили 450 x 109 CFU VSL # 3 (VSL Pharmaceuticals, Gaithersburg, MD) като 1 опаковка/ден в 30 ml диета, 15 ml два пъти дневно). Дозата се основава на проучвания върху гризачи и хора, при които телесното тегло (0, 73) се използва за скалиране между метаболитните размери на тялото (22-24).

Strave.

В нашата лаборатория бяха формулирани диети на базата на яйчен албумин и суроватъчни протеини, както вече споменахме (16). Диетите се вливат ежедневно в продължение на 16 часа (Compat Feeding Pump; Novartis Nutrition, Канада), за да се доставят 300 ml/kg през стомашния катетър за 24 часа, за да се постигне хранителен енергиен прием от 925 kJ · kg -1 -1 d -1 за REF/C-WN и 50% от препоръчителната доза от 461 kJ · kg -1 -1 d -1 за прасенца C-MR/C-MRP (25, 26). Приемът се коригира ежедневно спрямо теглото и 50% от ограничената диета се допълва, за да се поддържа същият прием на микроелементи, както в групите REF и C-WN, за да се избегнат дефицити на микроелементи, засягащи растежа, PS или тежестта на възпалението.

Напълняване и наддаване.

Дължината на раната и обиколката на гръдния кош бяха измерени под анестезия на изходно ниво и ден 14. Ежедневно се измерва телесното тегло.

Плазмена глюкоза, инсулин, аминокиселини, урея и кортизол.

Метаболитите се измерват в плазмата, събрана на 14-ия ден на 6 часа инфузионна инфузия. Инсулинът е измерен чрез RIA за свински инсулин (Linco Research, MO). Глюкозата се определя с помощта на глюкозна оксидаза (GM7 Micro-Stat, Analox Instruments, MA). Аминокиселините се определят чрез обратнофазова HPLC (Beckman Coulter) след автоматична дериватизация на о-фталалдиалдехид в предколона (27). Уреята и кортизолът бяха измерени с помощта на автоматизиран клиничен биохимичен анализатор (модел Hitachi 911, ON, Канада).

Инфузия и анализ на аминокиселини.

Етикетирането на 1- [пръстен-2Н5] фенилаланин (обогатен с 98%) се прилага като първична (35 μmol/kg) постоянна инфузия (35 μmol · kg -1 -1 h -1) в продължение на 6 часа при насищане на ден 14 кръв изтеглени на изходно ниво и на час по време на инфузията. Longissimus dorsi (LD) и мускулните влакна, представляващи бързо дръпнали гликолитични и бавно дръпващи се окислителни мускулни влакна, бяха отстранени веднага след убиването на прасенцата с натриев пентобарбитал. Аминокиселините (производни на n-пропилов естер хептафлуоробутирамид) в плазмата и мускулите се приготвят, както е описано по-горе (20). Обогатяването с фенилаланин се анализира чрез отрицателна химическа йонизация газова хроматография-мас спектрометрия (Hewlett Packard Model 5988A, CA), мониторинг на йони [M-FH] при съотношение маса към заряд от 383 и 388, съответстващо на немаркирани и маркирани йони. Индикатор: съотношенията на следи бяха определени с помощта на количеството суров йон и анализ на индикатора и естественото количество на фенилаланин (16, 20).

Потокът на фенилаланин се изчислява от разреждането на тромбоцитите на маркера в групата на фенилаланин, както е описано по-горе (16). Оборотът на протеините в цялото тяло се изчислява от потока на фенилаланин въз основа на съдържанието на фенилаланин в прасенцата (3,7 g/100 g) (28). FSRs на смесените протеини в LD и masseter бяха определени като скоростта на нарастване на свързаното с протеини обогатяване на фенилаланин спрямо обогатяването на фенилаланин на вътреклетъчния свободен резервоар (20). Обогатяването с фенилаланин в смесени плазмени протеини първоначално се използва като заместител на обогатяването на базовия или базовия мускулен протеин.

Анализ на факторите за иницииране на транслацията и общите убиквитинирани протеини.

За да оценим диетичните и пробиотичните ефекти върху активирането на факторите за иницииране на транслация, ние изследвахме фосфорилирането на mTOR и неговите субстрати, p70S6K1 и 4E-BP1, само в LD проби. Замразени LD проби се обработват, както е описано по-горе, за да се анализират eIF4E * 4E-BP1 комплексът и фосфорилираният Akt, mTOR, S6K1 и рибозомният протеин S6, eIF4E, 4E-BP1 (27, 29, 30). Като индекс на убиквитин-медиирана протеолиза, общите нива на убиквитиниран протеин се определят в LD проби чрез имуноблотинг, както е описано по-горе (27).

Статистически анализ.

Всички данни бяха анализирани с помощта на SPSS версия 11.0 (SPSS Inc., Чикаго, Илинойс) и отчетени като средно ± SEM. Ежедневното наддаване на тегло се анализира чрез повтарящи се мерки ANOVA. Непрекъснатите променливи бяха анализирани чрез еднопосочен ANOVA, последван от постхокална най-малка квадратна разлика и тест на Dunnett за групови сравнения, използващи C-WN група като група за сравнение и p

Ежедневно телесно тегло на прасенца. REF, черни квадратчета; C-WN, отворени триъгълници; C-MR, отворени пръстени; C-MRP, сиви квадратчета. Средно ± SEM, n = 8; * стр

Скорост на синтеза на скелетни мускулни протеини. LD FSR (черни ленти) и маса FSR (бели ленти). Средно ± SEM, n = 8; * стр

Панели A - D, Молекулни контроли за транслация на иРНК и убиквитинирани протеини. A, относително фосфорилиран Akt (черни ленти) и mTOR (бели ленти). B, относително фосфорилиран 4EBP1 (черни ленти) и eIF4E * 4E-BP1 комплекс (бели ленти). С, относително фосфорилиран p70S6K1 (черни стълбове) и рибозомен протеин S6 (бели стълбове). D, относително общо убиквитинирани протеини. Средно ± SEM; * p -1 -1 d- 1) и фосфорилирано ниво на p70S6K1 (r = 0, 45, p

Корелации на Пиърсън на плазмената концентрация на левцин (μmol/l) с (A) наддаване на тегло (g · kg -1 -1 d- 1; r = 0, 46, p C-MR

мацит с ограничени макронутриенти

колит с ограничени хранителни вещества и пробиотици