диагностика

Средно се наблюдава увеличаване на инфекциите, причинени от хламидия и микоплазма. Повишената честота на заболяването се потвърждава и от нашата лабораторна статистика.

Това са бактерии, които живеят в човешките клетки, ние знаем повече от тях, но две групи са особено важни:

  • някои причиняват инфекции на пикочно-половата и репродуктивната системи,
  • последните засягат главно горните и долните дихателни пътища.

Инфекциите, причинени от Chlamydia trachomatis, се считат за най-често срещаните от всички полово предавани болести. Диагностиката и лечението на хламидийната инфекция са по-трудни, тъй като в повечето случаи тя е скрита, без големи видими симптоми. Микоплазмите и уреаплазмите са най-честите колонизатори на човешкия урогенитален тракт след хламидия. Тези патогени са свързани с остър уретрит при мъжете и вагинит и цервицит при жените. Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum често се диагностицират при жени без симптоми на заболяването. Както Mycoplasma pneumoniae, така и Chlamydia pneumoniae са причинители на инфекции на горните и долните дихателни пътища, често с асимптоматично или леко протичане.

Ранната лабораторна диагностика на тези патогени, лечението и контролът на инфекциите, включително превантивни мерки, изискват непрекъснато изследване и изследване на клиничния и епидемиологичния контекст.

Диагностични методи

Методи за директна диагностика се основават на доказателства за въпросния микроорганизъм в проба, взета директно от мястото на съмнение за инфекция. Тъй като това са микроорганизми с взискателни културни условия, отглеждането не се използва при нормални лабораторни условия. Следователно методите за директно откриване се основават на откриване на антиген или ДНК. Решаващият фактор при методите на преки доказателства е качеството на взетата проба. Това е особено важно при хламидиите, тъй като те са вътреклетъчни микроорганизми и поради това е важно пробата да съдържа епителни клетки. Пробите, съдържащи само секрети и ексудати, може да не са достатъчни за правилната диагноза. Тези методи могат също така да открият мъртви микроорганизми, които могат да присъстват в проба след края на терапията, докато не бъдат елиминирани от имунната система. Поради това е препоръчително да се предприемат проследявания след лечението с интервал поне 3 седмици.

Индиректна диагностика се основава на откриването на антитела в серума чрез различни имунологични методи.

Chlamydia trachomatis

Директна диагностика:

  • доказателства за гл. trachomatis - чрез имунохроматографски метод (при поискване Клинична микробиология I),
  • ДНК доказателство Ch. trachomatis - PCR метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

Директната диагноза се използва главно за прогнозиране на острия стадий на инфекцията, когато находката на ДНК е Ch. trachomatis ясни доказателства за инфекция. Разликата между двата метода, налични в Alpha Medical, е в чувствителността и специфичността на анализа. ДНК PCR методът има по-висока чувствителност и специфичност. При този метод специфичността достига 98-100%, а чувствителността е 96-100% (при концентрация на Ch. Trachomatis 5-10 IFU/ml). Определянето на антигена е имунохроматографски бърз тест, при който е необходимо да се вземе предвид възможността както за фалшива положителност, така и за отрицателност. Не е възможно да се разграничат отделни видове хламидии (Ch. Trachomatis, Ch. Pneumoniae, Ch. Psittaci) чрез гореспоменатия бърз тест, ако те са присъствали в пробата.

Видове проби, подходящи за горните изследвания:

  • цервикален тампон, вагинален тампон, уретрален тампон - може да се изследва и по двата метода,
  • урина, тампон от конюнктивална торбичка - може да се изследва само чрез PCR, определяне на Chl. trachomatis в урината е премахната в нашите лаборатории, така че вече не е включена в новите видове искове.

Важни условия за правилно вземане на проби:

  • преди да избършете от шийката на матката, избършете слузта от шийката на матката и хвърлете този тампон, извършете събирането с втори тампон,
  • пациентът не трябва да уринира най-малко 1-2 часа преди да направи тампон на уретрата или да събере урина,
  • най-добре е да вземете първата струя сутрешна урина, 1 проба, предназначена за култивиране едновременно (необходима е средна струя урина) и за доказателство за Ch. trachomatis (необходим е първи поток на урина),
  • минимизиране на съхранението на естествената урина при стайна температура (преди прехвърляне в транспортна епруветка с PCR среда cobas).

Непряка диагностика:

  • определяне на антитела срещу Ch. trachomatis IgM, IgA, IgG (скринингов преглед) по ELISA метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми),
  • определяне на антитела срещу Chlamydia spp. IgA, IgG (потвърждаващо изследване) по метода Line Blot - в един анализ антитела срещу Ch. trachomatis, гл. pneumoniae и също така е възможно да се открият антитела срещу Ch. psittaci (всеки вид поотделно) (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

Различните състави на антигени, съдържащи се в различни ELISA комплекти, могат да доведат до различни резултати, особено при по-ниски нива на антитела. Следователно, в нашите лаборатории е възможно да се използва потвърждаващо определяне чрез метода Line Blot, който определя реактивността на антителата с отделни хламидиални антигени. Ние не извършваме потвърждаващото определяне на антитела по метода Line Blot автоматично, но само ако това се изисква изрично при поискване и в скрининговия тест установяваме положителността на антителата срещу хламидии (Ch. Trachomatis или Ch. Pneumoniae) в при поне един клас (IgM, IgA или IgG).

Доминиращият хламидиален антиген е специфичен за вида MOMP антиген (протеин на повърхностната мембрана). Отделните видове хламидии имат 25-35% различен аминокиселинен състав на MOMP антигените, което създава предпоставки за диференциация на отделните видове хламидии. Той обаче е надежден само за инфекция с един хламидиален вид. При коинфекция с няколко вида, кръстосаната реактивност на антителата срещу MOMP антигена може да възникне и с метода Line Blot. Следователно блотът съдържа други антигени: OMP2 (специфичен за видовете повърхностен мембранен протеин), HSP60 (Heat Shock protein) - е маркер за хронично възпаление и наличието на антитела от този тип е свързано с безплодие и реактивен артрит и MIP антиген (Macrophage потенциал за инфекциозност) - повърхностен фактор на вирулентност при вътреклетъчни микроорганизми. Антителата към отделни антигени са с различно значение при качествената оценка на блот. Поради голямото разпространение на Ch. пневмония в популацията обикновено е интерпретация на серологично изследване на антитела в Ch. trachomatis често предизвикателни.

Видове проби, подходящи за горните изследвания:

  • родна венозна кръв,
  • серум.

Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum

Директна диагностика:

  • изследване на култура на M. hominis и U. urealyticum за определяне на чувствителността към антибиотици - тест за идентификационна култура, базиран на различни метаболитни свойства и естествена устойчивост на микоплазми (при поискване Клинична микробиология I),
  • доказателства за ДНК на M. hominis - чрез PCR,
  • доказателства за ДНК на M. genitalium - чрез PCR,
  • доказателства за U. urealyticum DNA- чрез PCR.

PCR тестовете са изброени при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми.

Културното изследване предоставя възможност за полуколичествена оценка и в случай на положителна находка, също така предоставя информация за чувствителността към антибиотици. Това изисква събиране в специален транспортен носител, от който не е възможно да се извършват други изследвания на културата. Резултатите от изследването на културата са на разположение в рамките на 2-3 дни. ДНК на отделни микоплазми чрез PCR може да бъде изследвана от същата проба като ДНК на Ch. trachomatis. Недостатъкът на определянето на PCR в сравнение с изследването на културата е събирането на поредица от проби за 1 PCR анализ, така че в стандартния режим резултатите са достъпни в рамките на 5-7 дни.

Видове проби, подходящи за горните изследвания:

  • тампон на шийката на матката
  • вагинален тампон
  • уретрален тампон, урина - може да се изследва и по двата метода.

Важни условия за правилно вземане на проби:

  • условията са същите като тези, дадени за преките методи за доказване Ch. trachomatis.

Непряка диагностика:

  • при диагностика на урогенитални микоплазми не се извършва.

Chlamydia pneumoniae

Директна диагностика:

  • ДНК доказателство Ch. пневмония - PCR метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

Директно откриване на ДНК на Ch. pneumoniae трябва да бъде златният стандарт при диагностицирането на остри заболявания, като се има предвид, че има „серологичен прозорец“ (забавен отговор на антитела) през първите седмици на хламидиална инфекция. Ch ДНК може да бъде открита чрез PCR. pneumoniae от неинфекциозни ретикуларни тела, както и от неживи елементарни тела. Вземането на проби от най-подходящото място (според вида на инфекцията) и качеството на взетата проба имат решаващо влияние върху точността на диагнозата. Положителният резултат е ясно доказателство за инфекция, отрицателният резултат означава липса на хламидия в взетата проба, но не може да изключи хламидиална инфекция в тялото.

Видове проби, подходящи за горното изследване:

  • назофарингеален тампон, назофарингеален аспират - при инфекция на горните дихателни пътища,
  • храчки, бронхоалвеоларен лаваж - при инфекции на долните дихателни пътища,
  • кръвта, събрана в EDTA, може да помогне при диагностицирането на системна хламидиална инфекция, когато може да възникне персистиране на хламидия в моноцити и макрофаги, тя не е подходяща за остри респираторни инфекции,
  • синовиална течност при откриване на хламидия при пациенти с реактивен артрит.

Важни условия за правилно вземане на проби:

  • когато тампонирате носоглътката през устната кухина, е важно да поставите извития тампон зад задния ръб на мекия климат, да изтриете лигавицата в свода на назофаринкса с ветриловидно движение на тампона и да задържите тампона в назофаринкса за 5 секунди, за да абсорбира секретите,
  • когато тампон от назофаринкса през носната кухина, тампон през носната кухина в носоглътката трябва да се постави с леко спираловидно движение (докато не забележите съпротивление), леко и бавно завъртане на тампона в носоглътката за 5 секунди, за да абсорбира секрета,
  • за тампониране от носа или от сливиците има материали, за които е необходимо да се разчита на по-висок процент фалшив негативизъм и затова не го препоръчваме в нашата лаборатория за диагностика на Ch. пневмония.

Непряка диагностика:

  • определяне на антитела срещу Ch. пневмонии IgM, IgA, IgG (скринингов преглед) по ELISA метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми),
  • определяне на антитела срещу Chlamydia spp. IgA, IgG (потвърждаващо изследване) по метода Line Blot - в един анализ антитела срещу Ch. trachomatis и Ch. pneumoniae и също така е възможно да се открият антитела срещу Ch. psittaci (всеки вид поотделно) (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

В гл. pneumoniae, повишаване на IgM антителата настъпва едва 3-4 седмици след инфекцията; по време на реинфекцията антителата може изобщо да не се образуват. IgG антителата са положителни 6-8 седмици след инфекцията, по-бързото нарастване на IgG антителата е при реинфекции (1-3 седмици след реинфекция). След преодоляване на гл. pneumoniae, позитивността на IgG антителата обикновено продължава 3-5 години след първата инфекция, при повторни инфекции, по-дълги от 5 години. Полуживотът на IgA антитела е по-кратък от този на IgG антитела и поради това позитивността на IgA антитела се счита за най-добрия индикатор за персистираща инфекция. Въпреки това често се установява високо разпространение не само на IgG антитела, но и на IgA антитела при възрастната популация, което може да се дължи не само на постоянството на инфекцията, но и на многократното излагане на Ch. пневмония. За разлика от това, при малки деца под 5-годишна възраст положителността на антителата към Ch. рядко се появява пневмония, което може да се дължи на слаба антигенна стимулация или незрялост на имунната система.

Mycoplasma pneumoniae

Директна диагностика:

  • ДНК доказателства за M. pneumoniae - PCR метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

Култивирането на микоплазми е неподходящо за стандартна диагноза, тъй като микоплазмите растат много бавно и колониите се виждат едва след 2 - 5 седмици на култивиране. Следователно директното откриване на ДНК чрез PCR е подходяща алтернатива, тъй като позволява бързо да се получат резултати (те обикновено са на разположение в нашата лаборатория в рамките на 2-3 дни). Методът PCR е силно чувствителен и специфичен. Както при хламидиите, видът и качеството на пробата оказват голямо влияние върху правилната диагноза. Вероятността микоплазмите да бъдат открити може да се увеличи чрез изпращане на 2 проби на различни места. На етапа на инфекцията, когато IgG антителата се покачват, пробата от горните дихателни пътища може вече да е отрицателна за ДНК на M. pneumoniae, но това не изключва инфекция в долните дихателни пътища.

Видове проби, подходящи за горното изследване:

  • назофарингеален тампон, тампон от гърлото, назофарингеален аспират - при инфекции на горните дихателни пътища,
  • храчки, бронхоалвеоларен лаваж, ендотрахеален аспират - при инфекция на долните дихателни пътища.

Важни условия за правилно вземане на проби:

  • назофарингеални тампони могат да се направят през устната или носната кухина; инструкции за правилно събиране са дадени по-горе за ДНК Ch. пневмония,
  • тампон на носоглътката трябва да бъде допълнен с тампон на сливиците,
  • в случай на тампон на сливиците, сливицата на сливиците трябва да бъде изтрита старателно чрез спирално завъртане на тампона, преместване на тампона напред-назад и след това отгоре надолу; при пациенти след тонзилектомия трябва да се вземе тампон от задната стена на фаринкса,
  • при деца се препоръчват назофарингеални тампони и сливици, а при възрастни храчки.

Непряка диагностика:

  • определяне на антитела срещу M. pneumoniae IgM, IgA, IgG (скринингов преглед) по ELISA метод (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми),
  • определяне на антитела срещу M. pneumoniae IgM, IgA, IgG (потвърждаващо изследване) по метода Line Blot (при поискване Инфекциозна серология, доказателства за ДНК на микроорганизми).

Повишаването на IgM антителата настъпва още една седмица след инфекцията, но обикновено само по време на първична инфекция с M. pneumoniae. Следователно определянето на IgM е най-показателната стойност при децата в предучилищна възраст. Положителността на IgM рядко се съобщава по време на реинфекция. Ако се повиши IgM антителата по време на реинфекция, тази позитивност може да продължи дълго време и такава дългосрочна находка не корелира с клиничното състояние на пациента. IgG антителата се появяват 2 - 3 седмици след покачването на IgM по време на първична инфекция, покачването е по-бързо при реинфекция. Разпространението на IgG антитела срещу Mycoplasma pneumoniae е значително по-високо при малки деца (под 5-годишна възраст), отколкото разпространението на IgG антитела срещу Chlamydia pneumoniae. IgA антителата са най-добрият индикатор за активна инфекция - поради бързото им покачване и най-краткия полуживот в сравнение както с IgG, така и с IgM. След преодоляване на инфекцията позитивността на IgA антителата остава най-кратката, позитивността на IgG антителата може да продължи с месеци до години.

Заключение

В заключение, правилната диагноза и ранното лечение на хламидиални и микоплазмени инфекции е относително труден процес, който започва с щателно събиране на подходящ материал, продължава с правилния избор на метод на изследване и правилно тълкуване на резултатите. Инфекциите, причинени от описаните микроорганизми, се класифицират като така наречените атипични, които могат да доведат до нарушен имунитет и могат да засегнат почти всеки орган. Успешното лечение изисква добро сътрудничество не само между пациента и лекаря, но и от лаборатория диагностик.