1 Словашко общество за биохимия и молекулярна биология Институт по молекулярна физиология и генетика SAS Институт по биохимия, хранене и защита на здравето FCFT STU DROBNICOV MEMORIÁL 4-та година Сборник септември 2007 г. Kočovce ISBN

изтегляне

2 Проф. Ing. Ovudovít DROBNICA, д-р д-р.

3 СЪДЪРЖАНИЕ Спомени на проф. Ing. Ovudovít Drobnica, DrSc. 2 Организационен комитет 5 Раздел 5 Председател на Комисията 5 Членове на Комисията 5 Контакт 5 Програма 6 Списък на постерите 11 Сборник на резюмета 13 Раздел I 13 Раздел II 31 Раздел III 45 Раздел IV 81 Раздел V 83 Пощенски раздел 99 Списък на участниците 124 1

7 ОРГАНИЗАЦИОНЕН КОМИТЕТ НА СЕКЦИЯТА Ing. Алберт БРЕЙЕР, д-р. Докторска степен Зузана КЛИМЕСОВА Ing. Здена СУЛОВА, CSc. док. Ing. Ърнест ŠTURDÍK, CSc. Ing. Dagmar ZBYŇOVSKÁ, CSc. I. Ксенобиотици и връзки между структурата и действието на веществата II. Биоенергетика и мембранна биология III. Молекулярна, клетъчна биология и микробиология IV. Ензимология V. Биотехнологии ПРЕДСЕДАТЕЛ НА КОМИСИЯТА ЧЛЕНОВЕ НА КОМИСИЯТА КОНТАКТ проф. RNDr. Яромир Пасторек, д-р. Ing. Алберт БРЕЙЕР, д-р. док. RNDr. Милослав ГРЕКСАК, CSc. RNDr. Иван ХАПАЛА, CSc. док. Олга КРИЗАНОВА, д-р. RNDr. Карол ОНДРИАС, д-р. RNDr. Силвия ПАСТОРЕКОВА, д-р. Ing. Здена СУЛОВА, CSc. док. Ing. Ърнест ŠTURDÍK, CSc. Ing. Attila ZIEGELHÖFFER, д-р. Институт по молекулярна физиология и генетика SAS Vlárska 5, Братислава 3 Тел .: 02/Факс: 02 /

12 21 септември 2007 г., петък Закуска ПОСТ-РАЗДЕЛ Председатели: Силвия Пасторекова, Здена Сулова, Ернест Штурдик Прекъсване Спонсори лекции Обяд Заседание на комисията Обявяване на резултатите от конкурса на младите учени 10

15 Събиране на резюмета Раздел I Ксенобиотици и връзки между структурата и действието на веществата 13

17 R NH O O 1, NH 2 -O-PS 2, NH 2 -Prot 3, NaBH 4 O R = O-PS, Prot В първия етап се приготвя конюгат от глюкан и O-PS. Това се пречиства от реакционната смес чрез гел проникваща хроматография и се характеризира с 1 H-NMR спектроскопия. O-PS се свързва с 14-48% от линкерите, което води до 4,5-14% O-PS за глюкан мономерна единица. Следващата стъпка е свързването с протеини (BSA). След пречистване бе установено, че съдържанието на протеин в получения конюгат е 12-22%. Заключение Възможно е да се приготви конюгат с голям брой въглехидратни епитопи върху първична полизахаридна подложка. Освен това протеинът беше успешно свързан, като по този начин се получи допълнителна Т-клетъчна епитопна конструкция. Понастоящем получените материали очакват да бъдат използвани при по-нататъшни изследвания на имунологичните свойства. 1. Ефективно активиране на карбоксилни полизахариди за получаване на конюгати, Pavol Farkaš и Slavomír Bystrický. Въглехидрати. Pol., 68, 2007,

21 повече от един метал, оценката, интерпретацията и показването на експериментални данни е много по-сложно, затова заменихме простите изотерми с интерпретация, използвайки 3D сорбционни повърхности. Получените резултати демонстрират по-висок афинитет на йони Zn 2+ към местата на свързване на повърхността на лишеите и взаимно конкурентно въздействие между йони Zn 2+ и Co 2+ при заемане на места за свързване. Заключение: Използването на 3D графични методи за количествено описание на концентрационните равновесия на сорбцията на катион на метал в лабораторни експерименти дава възможност да се определи степента на конкурентния ефект в присъствието на други катиони, присъстващи в разтвор в широк диапазон на взаимни концентрационни съотношения. Този подход също така ще позволи да се наблюдават такива конкурентни ефекти, които са на ръба на видимост при използване на 2D графични методи. Тълкуването на резултатите с помощта на 3D зависимости е подходящо и за оптимизиране на експериментите и по-подробно описание на влиянието на няколко независими променливи върху процесите на биосорбция в трудни условия на замърсена природна среда. Препратки Ho Y.S., Huang C.T., Huang H.W.: Process Biochem., 37 (2002) Lodeiro P., Cordero B., Barriada J.L., Herrero R., Sastre de Vincente M.E.: Bioresour. Technol., 96 (2005) Loppi S., Frati L.: Environment. Монит. Asses., 114 (2006)

Ундулация на базалната мембрана на зародишната линия епител, разширяване на кръвоносните съдове в интерстициума и появата на кухини в зародишната линия епител, наблюдавани в тестисите. Намаленият относителен обем на зародишен епител, увеличеният относителен обем на интерстициума, както и увеличената честота на апоптоза показват увреждане на интерстициума и разкриват появата на оток. Стойностите на измерените от нас параметри показват, че живакът има токсичен ефект върху цялостната структура на тестисите и по този начин върху хода на сперматогенезата при дадените концентрации. Нашата работа потвърди отрицателното въздействие на неорганичната форма на живак върху структурните и функционални параметри на бъбреците и тестисите. 23.

27 намалява и активирането на Akt киназа в сравнение с контролните сърца. Изследване на MMPs показа, че при лекуваните с L-NAME сърца на плъхове активността както на тъкан, така и на серумен MMP-2 е намалена. От друга страна, в серума на лекувани с L-NAME плъхове значително повишава желатинолитичната активност с приблизително. Наблюдавана е 20 kda протеиназа. Заключението е, че развитието на NOD води до инхибиране на ERK и Akt киназните пътища и тези промени предполагат участието на тези каскади в отговорите на миокарда към NOD. Резултатите също така сочат към възможната връзка между ERK и Akt киназните пътища и активирането на enos и/или MMP-2. Освен това, намалената уязвимост към исхемична травма в сърца с плъхове с дефицит на NO може да бъде свързана с инхибиране на експресията на inos. Поддържа се от VEGA grant 2/6170/27 и APVV

Може да се заключи, че кверцетинът има по-добри антиоксидантни ефекти от рутина поради факта, че той се окислява предимно над рутина. Използвайки CV метода, сместа от двата антиоксиданта беше по-трудна за разграничаване, което личи от разделянето на пиковете, принадлежащи на отделните компоненти. Следователно, методът DPV е предпочитан за по-нататъшно измерване. Калибрационните зависимости от рутин и кверцетин са показани на фигура 2. Фигура 1: Сравнение на методите за измерване на смес от рутин и кверцетин а.) CV на рутина 1,6 mg/l, кверцетин 0,4 mg/l и b.) DPV на рутина 1,6 mg/l, кверцетин 1,1 mg/l. Фигура 2: Калибрационни зависимости, измерени по метода DPV кверцетин при -0,04 V срещу SCE и рутина при 0,1 V срещу SCE. Заключение: Използвайки волтаметрични методи, беше възможно да се картографират редокс свойствата на рутин и кверцетин, докато беше разработена методология за тяхното паралелно определяне и приложена към анализа на реални проби. Тази работа е създадена с подкрепата на проект VEGA 1/4299/07 и безвъзмездна помощ от Чарлз Университет 17 /

33 Раздел II Биоенергетика и мембранна биология 31

45 йони Ca 2+. Минимумът е най-изразен за съотношението на съотношението [Li +]/[Ca 2+] и [Na +]/[Ca 2 12: 1. Когато съотношението на концентрацията е по-ниско, дълбочината на минималната намалява. Не наблюдавахме появата на аномалии в зависимост от обратния потенциал и проводимост от моларната фракция на йони в смеси Ba 2+ -Ca 2+ или Cs + -Ca 2+ от луминалната страна на канала. Бариерният модел на проникване на йони през йонния канал счита наличието на аномалии в зависимост от обратния потенциал и проводимостта от моларната фракция за друго свойство на многойоновите канали, но поради липсата им броят на йони в проводящия път да бъдат еднозначно съдени. От гледна точка на модела на бариерната йонна пропускливост, по-съществено свойство е концентрационната зависимост на обратния потенциал. Счита се, че това е една от характеристиките, която теоретично се приема само за многойонови канали. Заключение: Резултатите ни показват за първи път, че канал RyR има и свойствата на проводимост на много-йонните канали, което отслабва досега приетата хипотеза за едноионния характер на този канал. 43

47 Раздел III Молекулярна, клетъчна биология и микробиология 45

55 в по-голяма степен от S клетки след краткосрочно и дългосрочно култивиране на клетки с cispt. Чрез имунопреципитация определихме, че в MDR линии L1210 (R, V), култивирани в присъствието на циспт, количеството Bcl-2 преобладава в комплексите Bcl-2/Bax в сравнение с L1210 (S). Увеличени количества Bcl-2 протеин (антиапоптотичен протеин), свързан в комплекс с Bax (проапоптотичен протеин), бяха открити в MDR линии L1210 след култивиране с cispt. Съотношението на тези протеини играе важна роля в регулирането на апоптозата (2). Също така определихме нивата на Bcl-2 и Bax в разтворими и мембранни фракции, без или в присъствието на различни концентрации на цисплатин. Заключение: Установихме чрез MTT анализ, че родителските L1210 клетки, които не експресират P-gp, са по-малко чувствителни към увеличаване на концентрацията на цисплатин, за разлика от това, процентът на апоптотичните клетки след инкубация с cispt е значително по-висок, отколкото при резистентните клетки. В същото време открихме и разлики в нивата на Bax и Bcl-2 в цитозолната и мембранната фракции от двата вида локуси, както и различни съотношения на двата протеина в комплекса Bcl-2/Bax, което предполага променен апоптотичен отговор в клетки, експресиращи P-gp. Литература: 1.-Lamming DW Jr: J. Undergrad. Sci. 3:, Басу и Халдар: Мол. Хъм. Предст. 4:, Благодарности: Тази работа е подкрепена от: apvt, vega-2/7122/7 и VEGA 2/080/26. 53

57 обозначено споразумение. Причината за специфичното разположение на пръстена, както и основната разлика от хомотримерите на PCNA, е наличието на три уникални интерфейса, които се различават един от друг по физикохимични свойства. Най-големият интерфейс с най-голяма комплементарност, брой водородни връзки и взаимодействия на заряда е между PCNA1-PCNA2 субединиците, което обяснява най-ниския K D (10-11 M), измерен за тези два протеина [4], както и пръстенната подредба. Структурата на димера PCNA12 е с форма V. Сравнението на димера PCNA12 с PCNA12 от хетеротримера показва различна кривина на димера PCNA12, както и структурни промени в интерфейсите PCNA2-PCNA3 и PCNA1-PCNA3, което предполага, че по време на PCNA123 образуване на хетеротример в димерните клетки на PCNA12. Литература: 1. Maga, G. & U. Hubscher. J. Cell Sci., P Warbrick, E. Bioessays, (11): p Krishna TS, Phenyo D, Kong XP, Gary S, Chait BT, Burgers P, Kuriyan J. J. Mol Biol 12 август; 241. p Dionne I, Nookala RK, Jackson SP, Doherty AJ, Bell SD. Мол. Cell, p Благодарности: Тази работа беше подкрепена с грант на МОТ на CIHR.Участието в Мемориала на Дробник през 2007 г. беше подкрепено с безвъзмездна помощ от Вега 1/4360/07. 55

79 (2 щама на S. agalactiae) са с размери 1095 и 1347 bp. Секвенирането и последващите BLAST анализи разкриват връзката им с алфаподобното протеиново семейство. Въз основа на това проучване е установена голяма вариабилност в организацията на отделни алфа-подобни гени. Поради тяхната променливост и зависимост от географското присъствие, тези гени може да не са полезни за откриване на S. agalactiae, но са доказателство за биологична променливост в това семейство протеини. Наличието на гена, кодиращ протеина Sip, се открива чрез мултиплекс PCR скрининг на колекция от 75 говежди изолати на S. agalactiae. За да се сравни възможната вариабилност в нуклеотидната последователност на sip гена, праймери в гена и универсален обратен праймер са проектирани и използвани в реакционната мултиплексна PCR смес. Този метод доказа високата идентичност на sip гена, както и неговата специфичност за S. agalactiae. Заключение: Резултатите от тази работа потвърдиха значителната вариабилност на повърхностните протеини на S. agalactiae, но генът за глътка е специфичен за S. agalactiae и следователно е полезен за откриването на този патоген. 77

81 и чрез скрининг на тези семейства с тази техника бихме могли ясно да потвърдим диагнозата HNPCC. Резултати и дискусия: Досега успяхме да идентифицираме първите 5 различни дълги генни промени, използвайки техниката MLPA (делеция на екзон 1-7 в гена hmsh2 при две несвързани индивиди, делеция на екзон 1-3 в гена hmsh2, заличаване на екзон 1 в гена hmsh2, дублиране на екзони 5-6 в гена hmsh2 и делеция на екзони 5-6 в гена hmh2) при 6 несвързани пациенти с HNPCC. Получените резултати сочат към факта, че дори в нашата популация дългите генни промени могат значително да допринесат за образуването на HNPCC. Заключение: Идентифицирането на тези нови видове мутации на зародишна линия при подозрителни пациенти с HNPCC е важно и за роднини, при които тествахме за наличие на дадена продължителна промяна, за да се избере група носители на мутации и да се включат в специална програма за превенция. В момента работим по идентифициране на сайтове, където е настъпила пробив и е загубена определена част от гена. След успешното въвеждане на техниката на нашето работно място, ние помогнахме за установяването на споменатата техника за доказване на продължителни генни промени в гените BRCA1/2 също в Катедрата по клинична генетика на Института по онкология на Света Елизабет. 79

83 Раздел IV Ензимология 81

84 Мемориал на Дробников, 4-та година, септември 2007 г., Кочовце 82

85 Раздел V Биотехнологии 83

101 Пощенски раздел 99

103 Резултатите потвърждават общото правило, че потенциалната достъпност на тежки метали до растенията е обратно свързана със стойността на почвената реакция и се влияе значително от обмяната на почвената реакция (ph/kcl). 101

109 (XG, HEC) в случая на XTH от стръкове настурция или от корени и семена на магданоз зависят от наличието на XGOs за разлика от XTH от семена на настурция, който хидролизира XG при липса на XGO (Farkaš et al., 1992 ). XTHs, изолирани от семена, имат почти еднакви разграждащи полимера активности при тези два донора при по-високи концентрации на XGO. Заключение: Разликите в изоелектричните точки (pi) и специфичността на субстрата на изследваните проби, изолирани от различни части на магданоз и настурция, биха дали информация за областта на изследванията, която все още не е изследвана. Това изследване беше подкрепено от словашката агенция за безвъзмездни средства VEGA No. 2/6133/26 и с грант No. II/2/2005 от Словашката академия на науките към Център за върхови постижения GLYCOBIOS. Референции: Ait Mohand F и Farkas V. Carbohydr. Рез. 341, 2006, Farkas V., Ait-Mohand F., Stratilova E. Plant Physiol. Biochem. 43, 2005, Farkas V., Sulova Z., Stratilova E., Hanna R., Maclachlan G. Arch. Biochem. Biophys. 298, 1992, Fry S.C., Smith R.C., Renwick K.F., Martin D.J., Hodge S.K., Mathews K.J. Biochem. J. 282, 1992, Iannetta P.M. и Fry S.C Phytochem. Анален. 10, 1999, Nishitani K. Int. Преп. Цитол. 173, 1997, Sulová Z., Lednická M., Farkaš V. Anal. Biochem. 229, 1995 г.,

117 анализ на крайния продукт. С нарастващото добавяне на сок от чесън респ. гранулираният чесън намалява обема и свода на продуктите. За да се подобри цялостното качество на продуктите, беше тествана годността на приложението на аскорбинова киселина като подобрител в пекарната. Заключение: Резултатите показаха, че най-приемливите продукти за оценяващите са 0,5 и 1% добавяне на сок от чесън и добавяне на аскорбинова киселина. Благодарности: Работата е подкрепена с безвъзмездни средства: APVT (), AV (4/0013/07) и APVV (031006). Фиг. 1 Влияние на различни концентрации на чеснов сок върху хода на фаринографските криви 115

128 KOČOVCE Имението и паркът се използват от Факултета по строителство на Словашкия технологичен университет в Братислава от 1967 г. и служат като учебна зала с възможност за организиране на конференции, семинари, обучение на студенти.