синдром

  • абстрактно
  • целта:
  • дизайн:
  • предмети:
  • размери:
  • резултатите:
  • заключение:
  • Въведение
  • методи
  • елементи
  • измерване
  • Агрегация на тромбоцитите в зависимост от лептина
  • Аналитичен подход
  • резултатът
  • дискусия

абстрактно

За да се провери дали отговорът на тромбоцитите към лептин е свързан с рискови фактори на метаболитен синдром.

дизайн:

предмети:

Проучихме 169 последователни пациенти, средна възраст = 43, 6 ± 9, 9 години, наднормено тегло (N = 57) или затлъстяване (N = 112).

размери:

Клъстерният анализ се използва за генериране на три клъстера въз основа на чувствителността на тромбоцитите към нарастващи дози лептин. Профилите на рисковия фактор на метаболитния синдром с три клъстера са сравнени чрез дискриминантен анализ.

резултатите:

Чувствителността на тромбоцитите към лептин липсва в клъстер 1, докато клъстер 3 има най-голям отговор на тромбоцитната агрегация за лептинова преинкубация. Нивата на плазмен лептин са значително намалени от клъстер 1 до клъстер 3 и при двата пола. Пациентите в клъстер 2 са имали умерен профил на чувствителност към лептин. Най-високите стойности на индекса на телесна маса (ИТМ) са по-чести при неотговорилите, докато преобладаването на висока обиколка на талията, както и хипертриглицеридемия и хипертония се увеличава с увеличаване на отговора на лептин от група 1 до група 3. Формула за рисков фактор на метаболитен синдром като специфична за групата в 69,0% от клъстер 1, 54,9% от клъстер 2 и 55,8% от клъстер 3. Циркулиращият лептин, обиколката на талията, плазмените триглицериди и ИТМ определят характерни модели на рисковите фактори на метаболитния синдром в клъстерите.

заключение:

При амбулаторни пациенти с наднормено тегло и затлъстяване рисковите фактори за метаболитния синдром са до известна степен успоредни на отговора на тромбоцитите към лептин. Такива корелации включват нива на плазмен лептин, обиколка на талията, плазмени триглицериди и ИТМ и могат да допринесат за прекомерен риск от сърдечно-съдови събития при пациенти с наднормено тегло и затлъстяване.

Известно е, че затлъстяването е свързано с ускорена атеротромбоза и повишена честота на сърдечно-съдови заболявания и смъртност. Няколко доказателства показват, че метаболитните нарушения, които често съпътстват наднорменото тегло, като инсулинова резистентност, хипертония, хипертриглицеридемия и липопротеин с висока плътност (HDL) холестерол, насърчават прогресията на атеросклерозата при пациенти със затлъстяване. 1, 2, 3 Промененият кръвоспиращ баланс може също да допринесе за прекомерен риск от остри сърдечно-съдови събития при затлъстели индивиди. 4, 5

Лептинът, продукт на ob гена 6, е протеин, секретиран главно от мастна тъкан, който сигнализира размера на енергийните запаси на централната нервна система, като модулира дейността на хипоталамусните центрове, участващи в регулирането на приема на храна и енергийния баланс. 7 Въпреки че изглежда, че лептинът играе основна роля в регулирането на телесното тегло и енергийния метаболизъм, някои доказателства предполагат, че този хормон може да участва в други патофизиологични механизми като имунна функция, ангиогенеза, костно образуване и плодовитост и експресия на лептинов рецептор. е демонстриран в различни тъкани. 8, 9, 10, 11, 12, 13

Метаболитният синдром е съвкупност от взаимосвързани рискови фактори, които изглежда пряко подпомагат развитието на атеросклеротични сърдечно-съдови заболявания. 22, 23 Метаболитният синдром също е свързан с хиперкоагулируемо състояние, което се състои от повишени нива на коагулационните фактори (тъкан фактор, фактор VII и фибриноген), както и инхибиране на фибринолитичния път (повишен инхибитор на плазминогенов активатор-1 и намален плазминоген на тъканите) активаторна активност). В допълнение, свързването на метаболитен синдром с ендотелна дисфункция и дислипидемия предизвиква агрегация на тромбоцитите, което допълнително увеличава риска от тромботични събития. 24 Изследването на връзката между тромбоцитния отговор към лептина и метаболитния синдром е от особен интерес.

В това проучване тествахме хипотезата, че чувствителността на тромбоцитите към лептин е свързана с променливите на метаболитния синдром, за да се провери дали респондентите се характеризират с типичен клинично/метаболитен високорисков фенотип.

методи

елементи

Нашата поредица се състоеше от 169 пациенти с информирано съгласие за наднормено тегло или затлъстяване, които постепенно бяха приети в амбулатория за профилактика и лечение на затлъстяване в университетската болница в Месина, Италия. Субектите, получаващи лечение с антитромботични средства (включително аспирин), контрацептивна или хормонозаместителна терапия, са изключени от проучването. Диагностичните критерии за метаболитния синдром бяха предложените от Националната програма за образование на Холестерола в САЩ - Панел за лечение на възрастни III (NCEP ATP-III): обиколката на талията е 102 см за мъжете или 88 см за жените; плазмени триглицериди -150 mg/dl; HDL холестерол 23 Протоколът за изследване е одобрен от местната комисия по етика.

измерване

Височината на тялото беше измерена без обувки с точност до 0,5 cm; телесното тегло е измерено без облекло с точност до 0,1 кг; индексът на телесна маса (ИТМ) се изчислява като тегло/височина 2 (kg/m2). Обиколката на лентата е измерена по средата между долния ръб на ребрата и лумбалния хребет. Артериалното кръвно налягане се измерва с помощта на сфигмоманометър Riva-Rocci (Zenith, Рим, Италия). Стойностите на кръвното налягане се събират от пациенти в покой в ​​легнало положение в продължение на поне 5 минути. Първото измерване беше изключено и беше взета предвид средната стойност от следващите три измервания, направени на интервали от 3 минути. Плазмена глюкоза на гладно (AutoAnalyzer, Beckman, Милано, Италия), HDL холестерол, триглицериди (CHOP-PAP процедура, Boehringer Biochemia, Милано, Италия) и лептин (Human Leptin RIA kit, Linco Research Inc., St. Charles, MO, USA )). са измерени за всеки записан пациент.

Събрана е и информация за хормоналния статус на жените (в пост-/пременопауза). Анализът взе предвид навиците на тютюнопушенето и употребата на антихипертензивни, хипогликемични и/или понижаващи мазнините лекарства през месеца преди включване в проучването.

Агрегация на тромбоцитите в зависимост от лептина

Отговорът на агрегацията на тромбоцитите към лептин се измерва, както е описано по-горе. 19, 20 Накратко, след гладуване през нощта, от всеки пациент в легнало положение от кубичната вена на рамото се взема проба от венозна кръв с помощта на канюла, поставена 30 минути преди събирането, за да се избегне инжекционният стрес и поддържана чрез бавна инфузия на физиологичен разтвор (0,5 ml/min). Взети са кръвни проби (25 ml) в конична полипропиленова епруветка, съдържаща 3,33 ml/l лимонена киселина/натриев цитрат/декстроза (ACD) (състояща се от 64 mmol/l лимонена киселина, 85 mmol/l натриев цитрат и 111 mmol/l декстроза ).

Богата на тромбоцити плазма (PRP) се получава чрез центрофугиране при 800 g в продължение на 20 минути при 4 ° C. PRP се центрофугира при 2000 g при 4 ° C, за да се образуват меки тромбоцитни пелети, ресуспендирани в N-2-хидроксиетилпиперазин-N '-2. -етансулфонова киселина и калиев хидроксид (HEPES) Тиродов буфер (буфериран с HEPES физиологичен разтвор (HBS)). състоящ се от 145 mmol/l NaCl, 5 mmol/l KCl, 0,5 mmol/l NaH 2 PO 4, 1 mmol/l MgSO 4, 5,5 mmol/l глюкоза, 3,0 mg/l говежди серумен албумин, 10 mmol/l HEPES, pH 7, 4 и се измива веднъж. Центрофугирането се извършва при 4 ° С, за да се сведе до минимум спонтанното активиране на тромбоцитите. 25

Плаките бяха преброени (Coulter International Corporation, Miami, FL, USA) и ресуспендирани в HBS буфер при концентрация 0,5 - 1 х 108 плаки/ml. Аликвотни части (0,4 ml), съдържащи 1 mmol/L CaCl2, се разпределят в агрегатометрични кювети. Аликвотна част от HBS беше използвана като референция, за да се посочи 100% в експериментите за оптична агрегация. Отговорът на агрегацията към агониста се наблюдава оптически (PACKS4, Helena Laboratories, Beaumont, TE, USA). Пропускането на светлина непрекъснато се сравнява с пропускането на светлина от HBS. Агрегацията на тромбоцитите се изразява като% от максималната агрегация.

За да се изследват ефектите на лептина върху агрегацията, индуцирана от агонист, 0,4 ml от тромбоцитната суспензия са предварително инкубирани с лептин 5, 10, 25, 50 или 100 ng/ml (Linco Research Inc., St. Charles, MO, USA) за 5 минути и след това стимулиран аденозин дифосфат (ADP) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 2 μmol/L (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA).

Аналитичен подход

Пациентите бяха агрегирани в три клъстера чрез K-аналитичен клъстерен анализ въз основа на техния% максимален агрегационен отговор на ADP от 2 μmol/l след преинкубация с нарастващи дози лептин. Поради изкривеното разпределение на% максимална агрегация, данните бяха трансформирани с логото. Клъстерният анализ дава възможност да се групират пациенти в клъстери, които имат подчертан агрегационен профил на тромбоцитите в отговор на нарастващи дози лептин. Квадратните евклидови разстояния бяха изчислени, за да се оцени разликата или разстоянието между пациентите в многомерно пространство, определено от% максимална агрегация. Колкото по-малко е разстоянието, толкова по-голям е афинитетът между пациентите, т.е. между техните профили на агрегация на тромбоцитите.

Моделът беше принуден да образува три клъстера, тъй като единственото проучване, сравняващо респонденти и пациенти, които не отговориха, беше проведено с плочи от бедни донори. 21 Всяко априорно определение на модели на тромбоцитен отговор от затлъстели донори въз основа на наличните знания може да ограничи нашето разбиране за връзката между тромбоцитната реакция към лептина и рисковите фактори на метаболитния синдром. По-рано съобщавахме, че наднорменото тегло и затлъстяването са свързани с постепенно прогресивно намаляване на чувствителността на тромбоцитите към лептин. Поради това стигнахме до заключението, че принуждаването на модела да формира три клъстера може да бъде добра стратегия според хипотезата, че ще има средно ниво на чувствителност на тромбоцитите между неотговарящите и отговорилите.

резултатът

Пациентите, включени в проучването, са имали средна възраст 43,6 ± 9,9 години. По-голямата част от пациентите са жени (66,9%) и 112 от 169 пациенти имат ИТМ по-голям или равен на 30 kg/m2. Най-често наблюдаваните рискови фактори за метаболитен синдром са нисък HDL холестерол (47,9%) и висока обиколка на талията (46,7%), последвани от високо кръвно налягане (38,5%), хипертриглицеридемия (35,5%) и хипергликемия (33, 5%). 7%). Статусът в постменопауза присъства при 37,2% от записаните жени.

Процентът на максимален агрегационен отговор на преинкубация с увеличаване на дозите лептин в трите идентифицирани клъстера е показан в Таблица 1. Плаките от пациенти в клъстер 1 (неотговарящи) не са имали отговор на лептинова преинкубация и% максимална агрегация е подобна на ADP 2 μmol/l самостоятелно (трансформиран в дневник% от максималната агрегация = 0,4 ± 0,3). За разлика от това, тромбоцитите от пациенти в клъстер 3 (силно реагиращи) имат много висока чувствителност към лептин, която започва при концентрация от 10 ng/ml с ясна връзка доза-отговор. Клъстер 2 (умерено реагиращ) има профил на зависима от лептин агрегация на тромбоцитите между групи в групи 1 и 3. Плазмените концентрации на лептин са по-високи при неотговорилите в сравнение с умерено и силно реагиращите и полът не влияе върху тези резултати. (Ред 1).

Маса в пълен размер

Нива на плазмен лептин в три клъстера.

Изображение в пълен размер

Възраст, пол, навици за пушене и постменопаузален статус не правят разлика между трите клъстера. Пациентите с наднормено тегло (ИТМ = 25–29,9 kg/m 2) са по-чести при пациенти с висока степен на отговор, докато много затлъстели индивиди (BMI = 35 kg/m 2 или повече) са по-чести при пациенти без отговор. За разлика от това, разпространението на високата честотна лента се увеличава с увеличаване на отговора на лептин от клъстер 1 към клъстер 3. Високите плазмени триглицериди, HDL холестерол и кръвното налягане са по-чести при пациенти с умерен до висок отговор в сравнение с неотговорилите. Плазмената глюкоза не е свързана значително със степента на тромбоцитна чувствителност към лептин, както и с употребата на антихипертензивни, хипогликемични и понижаващи липидите лекарства (Таблица 2).

Маса в пълен размер

Дискриминантният анализ идентифицира две дискриминантни функции, първата от които е много важна (Таблица 3). В група 1 имаше високо съгласие между действителното и предполагаемото членство в клъстера (неотговарящо). Споразумението беше справедливо за клъстери 2 и 3 (средно и силно отзивчиви): 10,9% от пациентите в клъстери 2 и 21, 5% от пациентите в клъстер 3 бяха класифицирани като функционално принадлежащи към клъстер 1 (Таблица 4). Общата корелационна матрица в рамките на групите показва, че коефициентът за връзката между ИТМ и обиколката на талията е 0,20. Коефициентът на Капа е 0,41, което съответства на справедливо до умерено общо съгласие между действителното и предполагаемото членство в клъстера. Когато изключихме ИТМ и обиколката на талията от дискриминантния модел, само 44,4% от случаите бяха класифицирани правилно. Съответните стойности, получени чрез включване на ИТМ само, обиколката на талията или и двете променливи са 52, 6, 53, 8 и 60,0%.

Маса в пълен размер

Маса в пълен размер

Силно значимият коефициент Box M показва, че рискът от погрешно класифициране от дискриминантната функция е много нисък, т.е.дефиницията на индивидуалните профили на тромбоцитния отговор към лептина е много надеждна. Сред променливите, разгледани в анализа, плазмените концентрации на лептин, обиколката на лентата, плазмените триглицериди и ИТМ допринасят значително за дискриминантната функция (Таблица 5). Когато ИТМ беше изключен от анализа, коефициентът на обиколка на лентата беше леко увеличен от 0,427 на 0,499. Възраст, пол, навици на тютюнопушене, постменопаузален статус, плазмена глюкоза на гладно и използването на антихипертензивни, хипогликемични или понижаващи липидите средства не допринесоха 1 или 2.

Маса в пълен размер

дискусия

Новото откритие на това проучване е доказателство, че пациентите с наднормено тегло или затлъстяване могат да бъдат групирани въз основа на тяхната степен на способност да реагират на тромбоцитите към лептин и че рисковите фактори за метаболитен синдром могат да допринесат за определяне на клиничния профил на респондентите.

Както чувствителните, така и неотзивчивите тромбоцити от здрави донори изразяват само дългата сигнална форма на ObRb, докато никоя не изразява кратката несигнализираща форма. Намалената експресия на ObRb върху тромбоцитната мембрана и/или вариантите на ObRb с нисък афинитет могат да бъдат използвани за обяснение на нереактивността на лептина. 21 Нашите резултати разширяват резултатите, докладвани в доклада на Giandomenico et al. 21 чрез демонстриране на съществуването на три групи с наднормено тегло или пациенти със затлъстяване с различна степен на тромбоцитна чувствителност към лептин. В допълнение, циркулиращият лептин и избрани метаболитни рискови фактори могат да разграничат клъстерите, т.е. да допринесат за определянето на значими клинични модели, свързани с отговора на тромбоцитите към лептин.

Увеличената обиколка на талията е силно свързана с намалена инсулинова чувствителност 28, а коремното затлъстяване е един от най-важните рискови фактори за метаболитен синдром. 22, 28, 29, 30 При физиологични условия е известно, че инсулинът намалява агрегацията на тромбоцитите чрез намаляване на тромбоцитните отговори към ADP и тромбин. 31, 32 Тромбоцитите от инсулинорезистентни пациенти имат намалена чувствителност към антитромбоцитните ефекти на инсулина, 33 и може да се предположи, че по-голямата инсулинова резистентност при пациенти с по-изразено коремно затлъстяване може да допринесе за профила на тромбоцитна чувствителност на лептин при нашите пациенти. проучване.

Дислипидемията може също да допринесе за повишено активиране на тромбоцитите. Доказано е, че плазмените триглицериди увеличават агрегацията на тромбоцитите и честотата на венозна тромбоемболия, докато тези неблагоприятни ефекти се обръщат от HDL холестерола. Тъй като метаболитният синдром се характеризира с дисбаланс на повишен окислен липопротеин с ниска плътност (LDL) и намалени нива на HDL холестерол, вероятно е да доведе до хиперагрегация. Друга характеристика на дислипидемията при метаболитния синдром е значително повишаване на нивата на липопротеини с много ниска плътност (VLDL), за които е доказано, че индуцират производството на тромбоцитни тромбоксан А2 чрез свързване на CD36 лиганд. Лигандът CD36 улеснява доставянето на мастни киселини за производство на тромбоцитни тромбоксани, които стимулират агрегацията на тромбоцитите, индуцирана от колаген. 38

Нашите открития не показват, че зависимата от лептин агрегация на тромбоцитите е причинно свързана с рискови фактори за метаболитния синдром. Всъщност както тромбоцитният отговор на лептина, така и метаболитният синдром могат да бъдат различни ефекти от едно и също състояние на заболяването, т.е. инсулинова резистентност. Възможно е обаче едновременното съществуване на чувствителност към лептин и избрани метаболитни рискови фактори да докладва за добре дефиниран високорисков профил в популацията с наднормено тегло или затлъстяване при амбулаторни пациенти и следва да се извършат допълнителни проучвания, за да се изясни прогностичното значение на такава асоциация.,

Нашето проучване също има някои ограничения. Плазмените концентрации на инсулин не са измерени. Следователно не е възможно да се оцени точно степента на инсулинова резистентност и нейния принос за нашите резултати. Въпреки това, избрани рискови фактори за метаболитния синдром, като обиколката на талията и триглицеридите, са силно свързани с намалена инсулинова чувствителност. 28 Освен това, както показват резултатите от едномерния анализ, връзката между клъстерите и някои рискови фактори за метаболитния синдром, като обиколката на талията и HDL холестерола, може да бъде нелинейна. Този проблем може да е намалил дискриминационния капацитет на тези променливи в нашето проучване. И накрая, дизайнът на напречното сечение не позволява да се провери дали зависимата от лептин агрегация на тромбоцитите се увеличава със загуба на тегло, подобрена чувствителност към лептин и намалени нива на лептин. Въпреки че лишаването от калории причинява по-голям хемостатичен отговор на лептин при индивиди с нормално тегло, 39 тази находка трябва да бъде повторена проспективно при пациенти с наднормено тегло и затлъстяване.

В заключение, нашето проучване показва, че способността на тромбоцитната агрегация към лептин и метаболитния синдром са тясно свързани. Нашето проучване предоставя допълнителна подкрепа за хипотезата, че директното взаимодействие на адипоцитите с тромбоцитите може да допринесе за прекомерен риск от сърдечно-съдови събития при пациенти с наднормено тегло и затлъстяване. Въз основа на нашите и предишни проучвания изглежда разумно да се провери дали характерният модел на реакция на агрегация на тромбоцитите към лептин характеризира пациенти с особено висок риск от сърдечно-съдови усложнения.