абстрактно
Голяма част от пасивната защита, осигурена от антимикробни средства в човешкото мляко, се дължи на наличието на IgA почти изключително в димерна или секреторна форма (16). Той присъства в най-високите концентрации през първите дни след раждането (в коластрата) и след това постепенно намалява до базово ниво от 0,2 до 0,3 g/l (13, 14). sIgA е по-устойчив на киселинни условия и протеолитичната активност на чревните ензими от серумния IgA (17) и е установено, че е непокътнат в значителни количества във фекалиите (17, 18). Местата на действие на погълнатия IgA са ограничени, тъй като този Ig може да не се абсорбира в значителни количества от чревния тракт (19). Доказано е, че млякото се абсорбира за кратък период от 18 до 24 часа след раждането (18), въпреки че значението за бебето е неизвестно.
Редица sIgA антитела са описани в човешкото мляко срещу често срещани хранителни антигени, бактерии и вируси, на които майката е била изложена (13, 14, 20-22). Тези антитела изглеждат особено важни през първите няколко дни от живота, когато производството на IgA лигавица при деца е недостатъчно (21, 23). След поглъщане се смята, че IgA антителата към майчиното мляко пасивно предпазват бебето, като се свързват с IgA рецепторите на луминалната повърхност на ентероцитите, като по този начин намаляват или предотвратяват навлизането на антиген през незрял стомашно-чревен епител (24). В експерименталния модел на Walker et al. (25) са показали, че чревните антитела могат да предотвратят резорбцията на естествените протеини и вместо това да увеличат усвояването на разграден материал, вероятно чрез свързване на антигени и излагането им на чревни ензими. IgA антителата могат също да играят роля в секрецията на потенциални хранителни алергени от човешкото мляко чрез образуване на имунни комплекси, които могат да бъдат фагоцитирани от макрофагите в човешкото мляко (24). В предишни предварителни проучвания, проби от коластра от майки, чиито новородени по-късно показват признаци на CMA (13) или развиват орален CMA (14), нисък общ IgA (13, 14) и ниски нива на специфичен IgA в кравето мляко (13).
Целта на това проучване беше да се определи съдържанието на общ IgA в млякото и кравето мляко в коластрата и човешкото мляко във връзка с последващото развитие на CMA при кърмачета.
методи
Субекти.
Кърмачета и майки на кърмачета, които имат симптоми, предполагащи хранителна алергия, са включени в диета: храни, за които се подозира, че причиняват симптоми при кърмачета, напр. Кравето мляко, зърнените култури (ръж, пшеница, овес и ечемик), яйцата и рибата бяха изключени от диетата на майката и бебето. Здравите деца имаха диета, подходяща за тяхната възраст. Всички атопични майки са били безсимптомни (без сенна хрема, екзема, уртикария или астма) през периода на лактация. По време на проучването майките не са имали лекарства и тези, които са имали мастит през предходните 4 седмици, са изключени.
Протоколът за изследване е одобрен от комисиите по етика на Болницата по кожа и алергии на Централната болница в Хелзинки и град Хелзинки. Получено е информирано съгласие от майки за вземане на проби от кърма и за дългосрочно проследяване на техните деца.
Кожни тестове.
Тестовете за убождане на кожата бяха извършени с търговски екстракт от краве мляко (Soluprick, Allergologisk Laboratorium A/S, Horsholm, Дания) на коремната страна на предмишницата, като се използва 1-милиметров ланцет с върха с ръка. Като положителна контрола се използва хистамин дихидрохлорид (10 mg/ml; Soluprick). Реакциите бяха червени след 15 минути и се считаха за положителни, ако средният диаметър на косъма беше ≥ 3 mm, отрицателната контрола беше 0 mm и положителната контрола беше ≥ 5 mm едновременно.
Протокол за краве мляко и зърнени култури.
Вземане на проби от човешко мляко.
Първата проба от човешко мляко е взета от майките през първите 2 седмици след раждането и след това на възраст от 1, 3 и 6 часа от бебето. Допълнителни проби бяха взети по време на появата на симптомите на CMA. При седем майки се вземат проби от мляко често на всеки трети ден, за да се определи точния ход на нивата на IgA в кърмата. По време на кърменето са получени средно по 2,6 проби на майка (диапазон от 1 до 12).
Гърдите се измиват с топла вода, преди да се събере млякото с ръчна смукателна помпа. Веднага след събирането, проби от човешко мляко, 20 до 50 ml, се центрофугират при 1400 х g при стайна температура в продължение на 15 минути, за да се отдели мастният слой. Впоследствие мазнината се отстранява и супернатантата се събира, замразява и съхранява при -70 ° C до по-нататъшно определяне на човешкия IgA по майчина линия.
Откриване на общите IgA и IgA антитела в човешкото мляко срещу краве мляко.
След размразяване пробите от човешко мляко се разреждат 1: 5 в PBS (рН 7,4), включително 0,05% Tween 20. Остатъкът от мазния слой се отстранява чрез центрофугиране при 17 000 xg за 10 минути при 4 ° С. Супернатантите се използват за определят IgA антитела към краве мляко и допълнително се разреждат 1: 2 за измерване на общия IgA. Общият IgA на майчиното мляко се определя чрез радиална имунодифузия, като се използват LC-Partigen IgA имунодифузионни плаки с N Protein Standard SL като калибратор в съответствие с инструкциите на производителя (Dade Behring, Marburg, Германия). Резултатите се изразяват в грамове на литър.
Статистически анализ.
Резултатите са анализирани от опитен статистик. Данните бяха анализирани с помощта на ANOVA за многократни измервания с майки като клъстери. Тъй като съдържанието на IgA е изкривено, към стойностите на IgA е приложена логаритмична трансформация преди монтирането на модела. Тъй като съдържанието на IgA първоначално намалява по-бързо и след това почти на ниво, логаритъмът на възрастта на детето се използва като обяснителна променлива. При анализа изходният модел беше следният: ln (възраст) като произволна и системна част; ln (IgA) n ln (възраст) * (1 галерия + 1 атопия на майка + 1 симпатоми), където 1 символ е указател на променлива за символ. Бяха изключени незначителни термини (значимост> 5%). Моделите бяха сравнени от ANOVA. Тестът на Крускал-Уолис е използван за определяне на статистическата значимост на възрастовите разлики.
Тестът χ 2 се използва за определяне на разликите в пропорциите. Анализите бяха извършени с помощта на софтуер S plus 4 (MathSoft, Inc., Сиатъл, Вашингтон, САЩ) и софтуер StatView 4.0 (Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA, USA).
РЕЗУЛТАТИТЕ
Клинични характеристики на изследваната популация.
По време на проследяването 48 майки (69% с атопична конституция) са имали дете, което е развило клинично излагане на краве мляко (14 деца с анамнеза за продължителни колики), осем (38% с атопична конституция) имат дете, което е продължило инфантилно колики, но са имали отрицателна доза краве мляко (контролна група за заболяване) и 31 (23% с атопична конституция) са имали здраво дете. Демонстрирана свръхчувствителност към ръж, пшеница, овес и ечемик е демонстрирана при 32 от 48 (67%) деца с CMA. Продължителността на изключително кърмене е сравнима при кърмачета с CMA, медиана 3,5 месеца (диапазон 0 - 7 месеца); при кърмачета в контролната група на заболяването медианата е 3,0 месеца (диапазон, 1 седмица до 6 месеца); и при здрави бебета медианата е 3,0 месеца (диапазон, 1 седмица до 6 месеца). От 48 деца с CMA, 35 (73%) са били кърмени изключително по време на симптомите на CMA. Средната възраст по време на появата на симптомите на CMA е 1,3 месеца (диапазон, 4 d до 4 месеца) и по време на клиничното изпитване 4,9 месеца (диапазон, 4,0 - 5,9 месеца). Атопична конституция на майката корелира с развитието на CMA при кърмачета (p = 0 0003; χ 2 тест).
Отговорът на теста за кожата на кравето мляко е положителен при 15 от 48 (31%) пациенти с CMA. В клиничната покана за краве мляко 26 (54%) бебета са получили незабавни и 22 (46%) забавени отговори. Дванадесет деца са имали локална уртикария веднага след нанасяне на капка краве мляко върху кожата или устните си. От останалите 20 деца те са имали екзема, пет са имали стомашно-чревни симптоми, а 11 са реагирали както на кожата, така и на стомашно-чревното орално краве мляко. В допълнение към други симптоми на CMA, четири деца са имали симптоми на горните дихателни пътища (остра инфекция на средното ухо, алергичен ринит или хрипове).
Общи и специфични нива на IgA в кърмата.
Взети са проби от коластра (дни 2-5) от седем майки с дете, което впоследствие е развило CMA и от 22 майки на здрави деца. ANOVA за повтарящи се мерки осигурява приблизителна стойност (геометрична средна стойност) за IgA на 3-ти ден от 0,38 g/l (95% CI, 0,24-0,82 g/l) за майки, които са развили CMA и 0, 82 g/l (95% CI ). CI 0, 99–1, 51 g/l) за майки, чието дете е останало здраво или е имало детски колики, но не и CMA (p 
Концентрацията на общия IgA в млякото на майки със здраво бебе (отворени пръстени) и при тези, които имат бебе с алергия към краве мляко (затворени квадрати) в зависимост от продължителността на лактацията. Плътните и пунктирани линии представляват моделирани геометрични средства при майки със здраво дете и при деца с CMA. За двете групи бяха използвани отделни модели, които се различават значително един от друг.
Изображение в пълен размер
Маса в пълен размер
Нивата на специфичните за кравето мляко IgA антитела в млякото корелират с общите нива на IgA (r = 0,39; p
Концентрацията на специфичен за кравето мляко IgA в млякото на майки със здраво бебе (отворени пръстени) и такива с бебе с CMA (затворени квадрати) като функция на кърменето. Плътната линия представлява моделирания геометричен диаметър. Използван е общ модел за двете групи, тъй като нивата на IgA са сравними в групите.
Изображение в пълен размер
Нивата на общите IgA антитела, специфични за кравето мляко и майчиното мляко, са сравними при майките на бебета с колики, но без CMA (контролна група на заболяването) и при пациенти със здрави кърмачета. Съдържанието на общи и специфични IgA антитела срещу краве мляко в кърмата не корелира с атопията на майката.
ДИСКУСИЯ
Както е отбелязано в това проучване, ниските нива на коластра и човешко IgA мляко могат да предразположат потомството към развитието на CMA. Освен това установихме, че ниският общ IgA в кърмата не е свързан с атопия на майката, а с алергично състояние на детето.
Кърмачетата могат да имат алергични реакции по време на изключително кърмене (29). Предполага се, че алергичните реакции към храната при тези бебета се причиняват от преминаването на малки количества протеин, консумиран от кърмачки, в кърмата и откриваеми чрез имунологични техники в кърмата (13, 27, 30). Всъщност присъствието на хранителни протеини в кърмата не е необичайно. Например бета-лактоглобулин е открит в млякото на 75% от майките, консумиращи краве мляко (30). Предишни проучвания обаче показват, че количествата протеини от краве мляко или техните разградени продукти, екскретирани в млякото, не са свързани с развитието на CMA (14). Това предполага, че антигените от краве мляко в човешкото мляко вероятно не са единствените фактори, влияещи върху индуцирането и поддържането на алергичните симптоми на кравето мляко на бебето.
Няколко фактора, като sIgA, допринасят за контролирания прием на чревни антигени от тънките черва. Много от тези фактори са слабо развити в неонаталния период. Съобщава се, че тези sIgA антитела се появяват в чревния секрет само след няколко месеца интралуминална антигенна стимулация от локален предшественик на плазмените клетки, продуциращи sIgA (31). Следователно е много вероятно, че в състоянието на относителен дефицит на sIgA, който се появява в ранна детска възраст, чуждите протеини могат лесно да получат достъп до системното кръвообращение (24). Тази тенденция на незрелите черва на новородените да позволяват прекомерно поемане на чужди антигени през лигавичната бариера се компенсира от пасивната защита на чревната повърхност, която обикновено се осигурява от поглъщането на човешка коластра (24). Много фактори в човешкото мляко могат да улеснят узряването на чревната бариера, като същевременно осигуряват секреторни антитела в чревния лумен, за да елиминират чужди антигени на чревната повърхност (32-34), което вероятно ще намали риска от сенсибилизация. Дефицитът на IgA в млякото може да доведе до повишена експозиция на чревната лигавица на потенциални алергени и да увеличи риска от хранителни алергии.
В това проучване общите нива на IgA антитела към майчиното мляко са най-високи в коластрата, намаляват бързо за 1 до 2 седмици и остават стабилни при 0,2 до 0,3 g/l в продължение на няколко месеца и в двете групи майки. Тези стойности са сравними със стойности, открити в предишни проучвания (13, 14). При майките с дете с CMA намалението е по-слабо изразено поради по-ниските изходни стойности. По-високите концентрации на sIgA в човешкото мляко през първите няколко седмици на кърмене могат да обяснят защо повечето деца с CMA не са проявили симптоми, предполагащи CMA до 2 до 4 седмична възраст. В това проучване са получени повече проби от мляко, отколкото по време на кърмене от тези майки, които са развили CMA при деца, отколкото при деца със здрави кърмачета. Това обаче беше взето предвид при моделирането.
И накрая, представяме доказателства за защитен ефект на антитела срещу коластра и човешко IgA мляко срещу развитието на CMA при кърмачета. Това може да е свързано с екскрецията на чужди хранителни антигени върху чревната повърхност. Ниското ниво на IgA в човешкото мляко може да предразположи потомството към развитието на хранителни алергии.
съкращения
алергия към краве мляко
Благодаря
Авторите благодарят на Dr. Kaisu Juntunen-Backman за предоставяне на съоръжения, Dr. Arja Hakulinen за набиране на пациенти и вземане на проби и Hanna Oksanen за анализ на статистически данни. Благодарим и на Marjo Leponiemi за отличната му техническа помощ.