абстрактно

Да се ​​изследват ефектите срещу затлъстяването на екстракт от нар (PLE) в миши модел на затлъстяване, предизвикано от диета с високо съдържание на мазнини и хиперлипидемия.

дизайн:

За експеримента срещу затлъстяването, ICR мишки и мъжки ICR мишки са хранени с диета с високо съдържание на мазнини, за да предизвикат затлъстяване. Когато теглото на групата с високо съдържание на мазнини е било с 20% по-високо от това на нормалната диетична група, животните са били третирани с 400 или 800 mg/kg/ден PLE в продължение на 5 седмици. По време на експерименталния период редовно се измерва телесното тегло и дневният прием на храна. След 5 седмици се третират различни мастни вложки и след PLE се измерват серумният общ холестерол (TC), триглицеридите (TG), глюкозата и липопротеините с висока плътност (HDL-C). В експеримента за абсорбиране на мазнини, както нормалните, така и затлъстелите мишки получават 0,5 ml липидна емулсия и PLE в доза 800 mg/kg едновременно. Серумните нива на TG в серума са измерени на 1, 2, 3, 4 и 6 часа след лечението. TG във фекалните екскрети се измерват след орално приложение на липидната емулсия на мишки. Ефектите на PLE и неговите изолирани съединения (елагова киселина и танинова киселина) върху активността на панкреатичната липаза са изследвани in vitro .

резултатите:

Групите, лекувани с PLE, показват значително намаляване на телесното тегло, енергийния прием и различни проценти на мазнини и серумно тегло, TC, TG, нива на глюкоза и съотношение TC/HDL-C след 5 седмици лечение. В допълнение, PLE значително намалява увеличаването на серумния TG и инхибира чревната абсорбция на мазнини при мишки, лекувани орално с мастната емулсия. PLE показа значителна разлика в намаляването на вкуса на затлъстелите мишки, хранени с високомаслена диета, но не показа ефект при мишки, хранени с нормална диета.

заключение:

PLE може да инхибира развитието на затлъстяване и хиперлипидемия при затлъстели мишки с високо съдържание на мазнини. Ефектите изглежда са медиирани отчасти чрез инхибиране на активността на панкреатичната липаза и потискане на усвояването на енергия. PLE може да бъде ново средство за подтискане на апетита, което засяга само затлъстяването, причинено от диета с високо съдържание на мазнини.

Затлъстяването е най-разпространеното метаболитно заболяване в развитите страни и се е превърнало в глобална епидемия през последните години. 1 Той е свързан с различни хронични заболявания, включително хиперлипидемия, захарен диабет, коронарна болест на сърцето и някои видове рак. В допълнение, затлъстяването, особено коремното затлъстяване, се свързва с дислипидемия, която се характеризира с повишени триглицериди (TG) и намалени нива на липопротеини на холестерол с висока плътност (HDL-C). Известно е, че прекомерното предлагане на мазнини е свързано с развитието на затлъстяване при мишки. Продължителното хранене с диета с високо съдържание на мазнини може да причини затлъстяване с хиперфагия, хиперглюконемия, хиперлипидемия и инсулинова резистентност. 4, 5 Освен това се смята, че затлъстяването, причинено от диета с високо съдържание на мазнини, може да допринесе за повишен растеж на бели и кафяви адипоцити. 6

експериментално

Женски и мъжки CD-1 (ICR) мишки (на възраст 3 седмици) са получени от лабораторията за животни в Пекин Vital River Laboratory Animal Technological Company (Пекин, Китай). Те бяха настанени в продължение на 1 седмица на 12/12 часа цикъл светлина/тъмнина в помещение с контролирана температура и влажност и при необходимост се захранваха със стандартна лабораторна вода. Стандартната лабораторна храна съдържа (в тегловни проценти) приблизително: 4% мазнини, 24% протеини, 65% въглехидрати и диета с високо съдържание на мазнини: 15% свинска мас (наситени мазнини), 20% зехтин (полиненаситени мазнини), 35% мазнини. % протеини, 15% въглехидрати, 0,5% витаминни смеси, 3% минерални смеси и 5% холестерол (предимно яйчен жълтък). И двете пилета също са получени от Лабораторния институт за животни към Китайската академия на медицинските науки (SCXK Jing 2001-0003).

материали

Използва се PLE (съдържащ 10,6% елагова киселина, приготвена в нашата лаборатория с номер за присъединяване 040818) и проба от купон (031006) се съхранява в нашата лаборатория за бъдеща употреба. TG, глюкоза, HDL-C и TC тестови комплекти са закупени от Beijing Zhongsheng High-Tech Bioingineering Company (Пекин, Китай). Липидната емулсия е закупена от Beijing Green Cross Company (Пекин, Китай).

методи

Ефекти на PLE върху затлъстяването при мишки, предизвикано от диета с високо съдържание на мазнини

Ефект на PLE върху апетита при мишки, хранени с нормална диета с високо съдържание на мазнини

Мишките бяха разделени на случаен принцип в четири групи (седем мъжки мишки и седем женски мишки на група): диета с високо съдържание на мазнини и група PLE, група с високо съдържание на мазнини, група с нормална диета плюс група PLE и група с нормална диета. Групите PLE се прилагат орално чрез PLE сонда в доза 800 mg/kg/ден в продължение на 5 седмици. Телесното тегло и приема на храна се наблюдават ежеседмично. Дължината на тялото беше измерена и в края на този експеримент бяха отстранени различни мастни накладки.

Ефекти на PLE върху серумните нива на TG при нормални мишки след еднократно перорално приложение на липидна емулсия

Мъжки ICR мишки (20.03 ± 1, 97 g) бяха разделени на три групи, всяка група съответстваща на телесно тегло (n = 6). Липидната емулсия се приготвя с 5 ml зехтин и 10 ml 1% разтвор на Tween-20 ултразвук в продължение на 10 минути. След като всички мишки гладуват 12 часа, те получават орална липидна емулсия в доза от 0,5 ml/мишка (съдържаща 0,046 mmol TG). В същото време групата на PLE получава орален PLE в доза от 800 mg/kg, групата на таниновата киселина получава танинова киселина в доза от 200 mg/kg, а контролната група получава същия обем вода. Серийни кръвни проби бяха взети от орбиталния синус на 0, 1, 2, 4 и 6 часа след приложение на липидна емулсия. Серумът се отделя чрез центрофугиране при 4 ° С и се съхранява при -20 ° С за по-късно TG анализ.

Ефекти на PLE върху серумните нива на TG при затлъстели мишки след перорално приложение на липидна емулсия

Затлъстелите ICR мишки, индуцирани от диета с високо съдържание на мазнини (мъже, 39, 9 ± 2,77 g), бяха разделени на две групи, PLE група и контролна група, всяка група съответстваща на телесно тегло (n = 6). Нормалната група е хранена със стандартна лабораторна чау. Липидната емулсия се приготвя, както е описано по-горе. След стомашен сондаж на липидната емулсия (0,5 ml/мишка), на PLE групата се прилага PLE в доза 800 mg/kg, а на затлъстелата контролна група и нормалната група се прилага нормален физиологичен разтвор. Серийни кръвни проби бяха взети от орбиталния синус, докато мишките бяха анестезирани с етер на 0, 1, 2, 4 и 6 часа след приложение на липидна емулсия. Серумът се отделя чрез центрофугиране при 4 ° С и се съхранява при -80 ° С за по-късни анализи.

Ефекти на PLE върху общата абсорбция на мазнини при нормални мишки след еднократно перорално приложение на липидна емулсия

Мъжки ICR мишки (19, 56 ± 1, 48 g) бяха разделени в четири групи (n = 6). След гладуване в продължение на 12 часа, те получават липидната емулсия чрез сонда в доза от 0,5 ml/мишка. Липидната емулсия се приготвя, както е описано по-горе. В същото време, когато групата на PLE получава перорален PLE в доза от 800 mg/kg, групата на таниновата киселина получава танинова киселина в доза от 200 mg/kg, групата на елаговата киселина получава елагова киселина в доза от 200 mg/килограма. 80 mg/kg и контролната група получават същия обем вода. След това се прилага стандартна храна за гризачи при 1.0 g/мишка. Фекалиите се събират за следващите 12 часа и се сушат на въздух през нощта при стайна температура. Всяка фекална проба се претегля и смила на прах. Количеството мазнини във фекалиите се анализира по метода на Kamera et al. 18 и диетичната абсорбция на мазнини се изразява като процент на погълната мазнина.

Ефекти на PLE върху активността на панкреатичната липаза in vitro

Активността на панкреатичната липаза се определя чрез измерване на скоростта на освобождаване на свободни мастни киселини от TG. Първо, липидната емулсия се разрежда с 0,1 М Tris-HCl буфер (рН 8, 4), за да се получи крайна концентрация от 30 цМ TG. Разредената емулсия (0,1 ml) се инкубира с 0,05 ml панкреатична липаза (крайна концентрация 5 U на епруветка) и 0,1 ml различни концентрации на разтвори на проби за 15 минути при 37 ° C. Активността на панкреатичната липаза се определя като милимоли мазнини от киселина, отделена на милилитър реакционна смес. Скоростта на освобождаване на мастни киселини е описана другаде. 19.

Статистически анализ

Всички стойности се отчитат като средна стойност ± SD. Статистическото сравнение между групи мишки беше изчислено с помощта на SPSS софтуер. Дисперсионният анализ с теста на Dunnett е използван за анализ на данните и критерият за статистическа значимост е P

екстракт

Ефекти на PLE върху телесното тегло при мишки, хранени с високомаслена диета в продължение на 5 седмици. ( а ) Мъжки мишки n = 6; ( б ) женски мишки (n = 5, група 5 имаше четири мишки). Група 1: диета с високо съдържание на мазнини; група 2: диета с високо съдържание на мазнини плюс PLE 800 mg/kg; група 3: диета с високо съдържание на мазнини плюс PLE 400 mg/kg; група 4: диета с високо съдържание на мазнини и сибутрамин 4,6 mg/kg; група 5: нормална диета. * P ** P

Ефекти на PLE върху серумни концентрации на TG при нормални мишки след перорално приложение на липидна емулсия (n = 6). (Квадратна) група липидни емулсии; (кръг) липидна емулсия плюс PLE група 800 mg/kg; (триъгълник) Липидна емулсия плюс танинова киселина 200 mg/kg. * P ** P

Ефекти на PLE върху серумна концентрация на TG при затлъстели мишки след перорално приложение на липидна емулсия (n = 6). (Квадратна) група с високо съдържание на мазнини; (кръг) нормална диета група; (триъгълник) Диета с високо съдържание на мазнини плюс група PLE 800 mg/kg. * P ** P 2 PLE намалява както дислипидемията на затлъстяването, така и сърдечно-съдовите рискови фактори, тъй като показва особено значително намаляване на процента на тегло на нивата на TG в корема и серума в сравнение с контролните мишки.

Това проучване също така показа, че PLE може да бъде ново усъвършенстващо средство за потискане на енергийния прием. При затлъстели мишки с високо съдържание на мазнини и мазнини ефектът на PLE върху енергийния прием е подобен на ефекта, потискащ апетита на сибутрамин, използван в клиниката. PLE може значително да намали приема на калории при мишки, хранени с високо съдържание на мазнини; в същото време, обаче, вкусът на PLE при мишки, хранени с нормална диета, не е най-малко повлиян от PLE. Когато наблюдавахме ежедневната активност на мишките, открихме, че PLE групите са по-малко активни от групите на сибутрамин. Той също така предположи, че механизмът на действие на PLE върху потискането на апетита може да се различава от този на сибутрамин. Предполагаме, че може да има близък афинитет към затлъстяването, причинено от диета с високо съдържание на мазнини. Точният механизъм на действие на PLE върху апетита при мишки, хранени с диета с високо съдържание на мазнини, все още е неизвестен и е необходимо допълнително проучване.

В заключение, PLE има значителни ефекти върху инхибирането на развитието на затлъстяване и хиперлипидемия при затлъстели мишки, хранени с диета с високо съдържание на мазнини. Предполага се, че потискането на енергийния прием и инхибирането на чревната абсорбция на мазнини в диетата чрез инхибиране на панкреатичната липазна активност могат да бъдат два възможни механизма за ефекта на PLE срещу затлъстяването.