елементи

абстрактно

Основното

Повишени нива на разтворим Axl (sAxl) в комбинация с лиганда на Axl рецептор, Gas6, са открити при чернодробна цироза и са проектирани като диагностичен инструмент. 20, 21, 22 Наскоро съобщихме, че sAx1 е точен биомаркер за напреднала фиброза, цироза и хепатоцелуларен карцином (HCC), който има AUC от 0,918 за откриване на напреднала доказана с биопсия фиброза (F> 3) и AUC от 0,935 за откриване на F4 в сравнение със здрави контроли. В това проучване ние преоценихме sAxl като биомаркер на чернодробна фиброза в сравнение с ELF ™ и TE анализите, използвайки чернодробна биопсия като референтен метод в кохортата за анализ и валидиране.

резултатът

Проучване на популацията

Включени са общо 392 пациенти (средна възраст: 50, 8 години; мъже: 55%). От тях 361 пациенти са имали хронични чернодробни заболявания, т.е. или синдром на припокриване, ALD, индуцирано от лекарства увреждане на черния дроб (DILI) и криптогенна цироза (Таблица 1). Тестовата кохорта, състояща се от 276 пациенти с хронично чернодробно заболяване и 31 здрави контроли (Медицински университет във Виена), е сравнена с група за валидиране (Медицински университет в Грац) от 85 пациенти. Двете групи не се различават значително по отношение на възрастта, пола и разпределението на ИТМ. Нито един от пациентите не е имал тежка сърдечна недостатъчност. Хронично бъбречно заболяване (ХБН) е налице при 4,1% от пациентите (15/361). Нито един от пациентите не е имал напреднала ХБН (4 или 5). Подробни характеристики на пациента са дадени в таблица 1.

Маса в пълен размер

Хистопатологичните резултати са налични при 311 от 392 участници в проучването. F2, F3 и F4 са налице при 20,9% (n = 65), 10,3% (n = 32) и 20,3% (n = 63) пациенти (Таблица 2а). Според образни техники цироза е налице при 16,6% (n = 65) пациенти (Таблица 1) (потвърдена чернодробна биопсия при 63/65, липса на чернодробна биопсия при 2/65, липса на цироза при 327 пациенти). Разпределението на степента на фиброза между различните етиологии на чернодробните заболявания, определено чрез чернодробна биопсия, е показано в таблица 2б. Всички резултати от теста за чернодробна функция са показани в таблица 2в.

Маса в пълен размер

Маса в пълен размер

Маса в пълен размер

Нивата на SAxl зависят от стадия на чернодробната фиброза

Нивата на SAxl според етиологията на чернодробните заболявания са показани в Таблица 3. Нивата на sAxl при пациенти с AIH/CLD са значително по-високи в групата за валидиране. Това се обяснява със значително по-високите нива на sAxl, открити при пациенти с PBC, което се дължи на подбора на селекция поради малкия размер на пробата, тъй като само 4 пациенти от кохортата за валидиране са сравнени с 13 пациенти в тестовата група. Общите нива на sAxl се увеличават в зависимост от стадия на фиброза (Фигура 1). Нивата на SAxl са значително по-високи при пациенти с F4 в сравнение с F0 до F3 (медиана на sAxl: 71, 6, интерквартилен диапазон (IQR) [53, 91; 94, 73] срещу 43, 4, IQR [35, 52; 55, 71 ]), както и при пациенти с цироза, както е показано в сравнение с пациенти без цироза, както и със здрави контроли (медиана sAxl: 72, 06, IQR [54, 06; 9, 01] срещу 43, 3, IQR [35, 85; 55, 54] срещу 40, 2 IQR [34, 2; 48, 0] (Фигура 1) Заедно тези данни показват, че нивата на sAxl не са се променили значително в ранните стадии на чернодробна фиброза (F0-F3), докато sAxl е силно повишен при чернодробна цироза (F4) в сравнение с напреднала фиброза (F3).

Маса в пълен размер

биомаркер

серумни нива на sAxl според етапа на фиброза, както и наличието на чернодробна цироза въз основа на образни методи. Статистически значимите разлики се изразяват като звездички: *** P 2, F> 3 и F4 в сравнение с пациентите и цирозата е 0, 737, 0, 749, 0, 801 и 0, 807 (Таблица 4). Изчисляването на съотношението sAxl/албумин повишава AUC до 0, 783, 0, 766, 0, 826 и 0, 831 (Таблица 4, Допълнителна фигура 1). Съотношенията sAxl/албумин според степента на фиброза и цироза са показани на фигури 2а и d.

Маса в пълен размер

Серумни нива на sAxl/албумин, серумни нива на ELF ™ и резултати от фиброскан, стратифицирани чрез чернодробна биопсия ( а - ° С ), както и стратифицирана от наличието на цироза въз основа на резултатите от образни тестове ( д - е ). Статистически значимите разлики се изразяват като звездички: *** P 3, F4 и цироза в сравнение с ELF ™ (Фигура 3, Таблица 4), както и TE (Таблица 4). Коефициентите на корелация на Спиърман sAxl със съотношение sAxl/албумин, ELF и TE са били 0,969 (P

Сравнение на диагностичната точност, показана като площ под кривата (AUC) на теста sAxl/албумин и ELF за значителна фиброза (F ≥ 2; ( а ) напреднала фиброза (F ≥ 3; ( б ) фиброза степен 4 (F4; ( ° С ) и чернодробна цироза, както е показано ( д )

Изображение в пълен размер

Съотношението sAxl и sAxl/албумин не зависи от пола и ИТМ

Съотношението на sAxl и sAxl/албумин е независимо от пола (средно sAxl [IQR]: мъже срещу жени: 46, 1 [37, 7; 58, 1] срещу 43, 82 [35, 48; 61, 15], P = 0,518; медиана на sAxl/албумин [IQR]: 1,0 [0,83 1,32] срещу 1,0 [0,80; 1,50], P = 0,683). В допълнение, съотношението на sAxl и sAxl/албумин е независимо от категорията на ИТМ. Общо 35,7% (n = 140/392) от пациентите са имали нормално тегло (ИТМ 23, 25, както и напреднала чернодробна фиброза и цироза. В това проучване ние се фокусирахме върху изследването на диагностичната точност на sAxl като биомаркер за значително и напреднала чернодробна фиброза в Това проучване потвърди sAxl като точен биомаркер на чернодробната цироза и неговата диагностична точност може да бъде допълнително подобрена чрез изчисляване на съотношението sAxl/албумин от AUC 0, 826 за диагнозата F4. 1, 29 чувствителност 77, 8 и бяха постигнати специфичност от 78, 5. По-специално, sAxl и sAxl/албуминрацио са независими от пола и ИТМ.

Axl е член на подсемейство TAM (Tyro3, ​​Axl, Mer) на рецепторни тирозин кинази и е известно, че участва в развитието на рак и медиира хеморезистентността. В допълнение към въздействието върху клетъчното оцеляване, пролиферацията, миграцията и ангиогенезата, Axl също играе роля при отстраняването на апоптотичните клетки, агрегацията на тромбоцитите и регулирането на производството на възпалителни цитокини. 27, 28 След протеолитично разцепване, извънклетъчният домен на Axl се освобождава в кръвта, наречена разтворим Axl (sAxl). Доказано е, че е повишен в серума или плазмата при няколко заболявания като аневризма на аортата, сърдечна недостатъчност, заболяване на периферните артерии, ХБН, системен лупус еритематозус, ревматоиден артрит и прееклампсия. 30, 31, 32, 33, 34, 35 В допълнение, нашата група показа, че sAxl се освобождава предимно от чернодробни миофибробласти, които обикновено са свързани с прогресията на чернодробната фиброза. Тези констатации са в съответствие с неотдавнашно проучване, което показва, че Axl участва в прогресията на чернодробната фиброза в модел на нокаут Axl, демонстрирайки, че Axl сигнализирането чрез специфичен арест на растежа е необходимо за активиране на чернодробни звездни клетки. 20.

Това е първото проучване, което сравнява диагностичната точност на sAxl като неинвазивен биомаркер на чернодробна фиброза с теста ELF-TE. Последните две са най-интензивно оценяваните неинвазивни тестове за чернодробна фиброза и са комерсиализирани. Резултатите от нашето проучване кореспондират добре с предишни доклади за диагностичната точност на теста ELF-TE. 2, 6, 8 И двата теста имат недостатъка на високите разходи. В допълнение, TE има ограничения в приложимостта, тъй като надеждни резултати не могат да бъдат получени при до 15,8% от пациентите, главно поради затлъстяването, наличието на асцит или по-малко опит на оператора. 8, 36, 37 По тази причина 14,4% от TE тестовете в нашата група трябваше да бъдат изключени от анализа.

За разлика от това, sAx1 е стабилен серумен маркер, който може лесно да бъде измерен чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) на ниска цена. Наскоро регистрирахме диагностична точност с AUC 0,918 (граница 53, 89 ng/ml) за откриване на F ≥ 3 и AUC 0,935 (граница 54, 0 ng/ml) за откриване на F4 в плазмата. 190 пациенти с хронично чернодробно заболяване в сравнение със здрави контроли. В нашето проучване включихме 360 пациенти с хронично чернодробно заболяване, както и 31 здрави контроли и се фокусирахме върху различаването на значителна до напреднала фиброза или цироза от по-ниски стадии на фиброза или здравословно състояние. По този начин sAxl постигна AUC от 0,801 (границата от 52, 98 ng/ml) при идентифициране на пациенти с F4. Точността на диагностиката беше увеличена до AUC 0,826 (прекъсване 1,29) за откриване на F4 (референтен метод за чернодробна биопсия) и AUC 0,832 (прекъсване 1,29) за откриване на чернодробна цироза (показване на референтен метод) чрез добавяне на общ серумен албумин в модела. Използвайки същата гранична стойност от 1,29, AUC за откриване на значителна фиброза (F> 2), напреднала фиброза (F> 3) и F4 беше 0, 763, 0, 766 и 0, 826. При прекъсване 1, 29, PPV и NPV за откриване на F4 са съответно 46, 2. 93,9%, като по този начин надеждно се изключва наличието на F4.

В този контекст трябва да вземем предвид, че използването на чернодробна биопсия като референтен метод, макар и златен стандарт, може автоматично да доведе до подценяване на неинвазивните биомаркери (AUC 39, 40

Освен това е доказано, че етиологията на чернодробните заболявания е основен фактор, влияещ върху ефективността на неинвазивните маркери на фиброзата. По-специално за холестатични чернодробни заболявания като PBC и PSC, данните за неинвазивна оценка на фиброза са ограничени. В допълнение, класическите хистологични точкови системи, като системите на Лудвиг, фиброзата могат да бъдат адресирани само частично чрез етапи 3 и 4 (справки 42, 43). В нашето проучване съотношението sAxl/албумин показва непостоянни гранични нива в кохорта от пациенти с AIH/CLD/припокриване със гранична стойност 3,66 за ≥F3, но гранична стойност 1,6 за диагнозата F4, което може да отразява пристрастия към размера на пробата, тъй като само 4 пациенти от тази група са класифицирани като F3 в чернодробната хистология.

И накрая, съотношението sAxl/албумин е точен маркер за напреднала чернодробна фиброза и цироза при NAFLD и вирусен хепатит. Поради своята лекота на използване и ниска цена, той е подходящ като скринингов параметър за значително напреднала чернодробна фиброза и цироза, особено когато ТЕ не е наличен или не може да се използва. Диагностичната точност на sAxl при AIH и холестатично чернодробно заболяване трябва да бъде потвърдена при различни кохорти пациенти.

Материали и методи

Проучване на популацията

Комерсиализирани тестове за чернодробна фиброза

ELF анализът се измерва в серум на ADVIA Centaur Immunoassay система съгласно протокола на производителя (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., NY, USA). TE с помощта на Fibroscan® (Echosens, Париж, Франция) се извършва на празен стомах и съгласно инструкциите на производителя. Резултати показват 23, 38

Статистически анализ

Количествените променливи бяха изразени като медиана с интерквартилен обхват (IQR) и сравнени с U-тестове на Mann-Whitney. Качествените променливи бяха описани с използване на абсолютни и относителни честоти и сравнени с помощта на Chi-Square или точните тестове на Fisher. Сравнението на повече от две групи беше извършено с помощта на теста на Kruskal Wallis. Коефициентът на корелация на Спирман е използван за оценка на корелацията между всички използвани неинвазивни тестове. Точността на sAxl е определена чрез AUC, за да се предскаже (1) значителна фиброза (≥F2), (2) напреднала фиброза (≥F3), 3) F4 и (4) цироза на черния дроб, както е показано като (A) един маркер и в комбинация с (С) серумни нива на албумин (mg/dl; изразени като съотношение sAxl/албумин). Индексът на Youden е изчислен за идентифициране на оптималните гранични стойности. Освен това са изчислени чувствителността, специфичността, PPV и NPV. P стойности