абстрактно

Основното

Нов флави-подобен РНК вирус, наречен GB вирус-C (GBV-C) или HGV, наскоро бе открит чрез молекулярно клониране от пациенти с хепатит (1, 2). Въпреки че ролята на вируса в причиняването на хепатит, различен от AE или други заболявания при възрастни, остава противоречива, предишни проучвания разкриват, че HGV се предава главно по парентерален път като кръвопреливане, употреба на наркотици, хемодиализа и вливане на плазмен продукт (2). –5). Други възможни пътища, като майката към бебето (6-8), сексуалното и хоризонталното предаване на домакинствата, все още се разследват.

вирус

Тъй като все още няма подходящ серологичен тест за остра HGV инфекция, методът на селекция остава метод на селекция чрез идентифициране на вирусни геноми с помощта на обратна транскрипция-PCR тест.

Повечето публикувани преди това проучвания за HGV инфекция са проведени при възрастни. Разпространението на HGV инфекция при деца не е достатъчно установено. HGV РНК е открита при деца в риск (9). Някои доклади предполагат, че HGV инфекцията е придобита в по-млада възраст от други известни видове вирусен хепатит (10, 11). Изследването на HGV инфекция при деца би помогнало да се изясни предаването и клиничното значение на този вирус. Следователно, това проучване е проведено при нормални индивиди, както и при деца, които са получили кръвопреливане за операция на открито сърце.

методи

Субекти . Проучени са 200 здрави деца, 100 момчета и 100 момичета на възраст от 6 до 12 години и със съгласието на родителите. От октомври 1990 г. до декември 1992 г. е проведено проспективно проучване на посттрансфузионен хепатит, включващо общо 94 деца. Децата, чиито серуми съдържаха откриваеми анти-HCV, както и тези с нарушена чернодробна функция преди трансфузия бяха изключени от това проучване. Серумите бяха събрани преди операцията, както и 1, 3, 6 и 12 месеца след операцията. Ефектите от HCV инфекцията вече са докладвани (12). Тридесет и осем от тези субекти бяха записани преди скрининг на анти-HCV от юли 1992 г., докато останалите 56 деца бяха включени след скрининг.

Серумните проби бяха внимателно аликвотни, за да се предотврати замърсяването и разграждането на вирусната нуклеинова киселина и се съхраняват при -80 ° С. Активността на ALT в серума беше измерена на автоматичен анализатор. Анти-HCV беше тестван от търговски наличен ELISA от второ поколение (хепатит С II; Abbott Laboratories, Северна Чикаго, Илинойс). Повърхностните антигени на вируса на хепатит В бяха проверени от RIA (Abbott Laboratories). Пациентите с положителна HGV РНК са били информирани по подходящ начин и тествани за HGV РНК 5 години след операцията.

PCR тест . РНК се екстрахира от 50 μl серум по едноетапния метод гуанидиний тиоцианат-фенол-хлороформ (13). Изолираната РНК се транскрибира обратно, както е описано по-горе, с 200 pmol произволен хексамер (Promega Corp., Madison, WI) и обратна транскриптаза (Superscript, GIBCO BRL Eggenstein, Германия) при 42 ° C за 45 минути и инактивирана при 72 ° C. С за 15 минути (12). Вложен PCR се извършва с праймери, получени от 5'-нетранслирания регион (14). След горещ старт от 94 ° C в продължение на 5 минути, бяха проведени 30 цикъла на PCR реакция с денатурация за 30 s при 94 ° C, отгряване за 30 s при 55 ° C и удължаване за 1 минута при 72 ° C. Вторият кръг на PCR се извършва по същия начин. Десет микролитра от вложени PCR продукти бяха подложени на 2% агароза гел електрофореза и оцветени с етидиев бромид. Вложените PCR продукти са 210 bp. Спазваха се стриктни процедури, за да се избегне замърсяване през целия процес на PCR (15). Серумните положителни и отрицателни контроли бяха използвани във всеки кръг на PCR с обратна транскрипция и бяха проведени два отделни анализа за всяка проба.

Статистика . Тестът χ 2 с корекция на Йейтс и U-тестът на Mann-Whitney са използвани за статистически анализ. P стойност (2 - 4, 16 - 18) и 2, 1% от бременните жени (8). Съвременните данни показват, че разпространението на HGV виремия при нормални деца не се различава значително от разпространението на възрастното население, докато е по-високо от разпространението на анти-HCV при деца (19). Документирано е, че предаването на HGV от майка на дете се е случило с по-висока честота от HCV, със скорост на предаване до 30-50% (6-8), и тези заразени деца е вероятно да развият персистираща инфекция. Това може да е причината за високата честота на откриване на HGV РНК при здрави деца. Необходими са по-нататъшни проучвания, използващи както PCR, така и серологични тестове, за да се определи истинската честота на разпространение чрез откриване на настоящи и минали инфекции.

Хроничните HGV инфекции са често срещани в предишни доклади при възрастни пациенти, вариращи от 38 до 90% (2, 4, 16, 17). Устойчивостта на HGV РНК при деца е 96% на 6 месеца и 65% на 1 година в това проучване. Забелязано е, че колкото по-млади са пациентите, толкова по-вероятно е те да станат хронични носители след заразяване с HGV. В нашето проучване рядко се наблюдава клирънс на вируса след 1 година трансфузия. Постоянството на HGV виремия се наблюдава при тези деца до 5 години. Продължителността може да бъде удължена, ако децата на превозвача се наблюдават за по-дълъг период. Способността за премахване на вируса след HGV инфекция изглежда се влияе от възрастта на пациентите.

Въпреки високата честота на HGV при деца, нито един от тези заразени индивиди не е развил пост-трансфузионен хепатит. За разлика от тях, заразени с HCV деца, както и заразени с HBV индивиди, развиват остър или хроничен хепатит. Не е наблюдаван хепатотрофен ефект на HGV при нашите пациенти. Причината за пост-трансфузионния хепатит при другите двама пациенти остава неизвестна.

HGV инфекциите не винаги са придружени от HCV. Изолираните HGV инфекции са често срещани при педиатрични пациенти. Всеки опит за локализиране на инфектирани с HGV индивиди чрез тестване само при пациенти със съществуваща HCV или HBV инфекция или при пациенти с абнормна чернодробна функция ще разкрие само част от случаите, заразени с HGV.

Въпреки че честотата на HGV инфекция е намаляла от 35% на 22% след въвеждането на анти-HCV скрининг, разликата не е статистически значима. Нашите открития показват, че скринингът срещу HCV може да не предотврати HGV инфекции, тъй като HGV инфекциите преобладават в нормалната популация, тъй като HCV инфекциите и изолираните HGV инфекции са често срещани.

Накратко, виремията на HGV не е необичайна при привидно нормални деца и е по-висока от разпространението на анти-HCV. Децата, претърпели операция на открито сърце, имат по-висок риск от HGV инфекция, отколкото възрастните. HGV инфекцията не е причинила клиничен хепатит при 5-годишно проследяване. Въпреки че е докладван значителен брой деца с хронична виремия на HGV, техният дългосрочен резултат трябва да бъде преразгледан.