абстрактно

Целта: За да се характеризира съдържанието на каротеноиди в избрани компоненти на средиземноморската диета, обичайно консумирани от гръцките мигранти в Мелбърн, група от населението, която поддържа традиционна диета и които показват относително високи концентрации на циркулиращи каротеноиди и ниска смъртност от сърдечно-съдови заболявания.

Дизайн и мостри: Опортюнистични колекции от диви (скакалци, амарант, шунка и глухарче, събрани от пътища и градини) и предлагани в търговската мрежа (цикория, ендивия) зелени листни зеленчуци и смокини през сезона. Храните са избрани въз основа на това, че те обикновено се консумират от гръцки мигранти, но не и от англо-келтски индивиди и преди това не са били добре характеризирани по отношение на тяхното съдържание на каротеноиди. Екстра върджин, студено пресован зехтин и "екстра леко" зехтин са получени от търговски източници. Пробите се екстрахират с тетрахидрофуран (или хлороформ: метанол за зехтин) и съдържанието на каротеноиди се определя количествено чрез HPLC с UV детекция. Анализирани са две до шест проби от зеленина и смокини. Приемът на храна се оценява с помощта на въпросник за честотата на храната.

Резултатите: Дивозелените зеленчуци съдържат високи концентрации на лутеин (магарешки бодил> амарант> тученица> глухарче) и β-каротин (свински бодил> амарант> тученица = глухарче). Магарешкият бодил и амарантът съдържат лутеин (15 и 13 mg/100 g) и β-каротин (3, 3 и 4,0 mg/100 g) в концентрации, по-високи от тези, наблюдавани в търговските видове цикория и ендивия. Фиг. Те съдържаха всички основни каротеноиди, появяващи се в плазмата, макар и в ниски концентрации. Студено пресованият екстра върджин зехтин съдържа значителни количества лутеин и β-каротин, но по-рафинираният „екстра лек“ зехтин не е.

Заключения: Тези компоненти на традиционната средиземноморска диета допринасят за по-високи концентрации на циркулиращи каротеноиди в гръцките мигранти в сравнение с англо-келтските австралийци.

Спонсорство: Това проучване се финансира до голяма степен от Националния съвет по здравеопазване и медицински изследвания в Австралия (грант № 974098). Екстра върджин зехтин, дарен от Picuba Foods, Marrickville, NSW, Австралия.

Изследване на седем страни показа, че средиземноморските популации, особено в Крит, имат най-ниската смъртност от исхемична болест на сърцето (ИБС) в Европа (Keys et al, 1986). Критската диета през 50-те години (Kromhout et al, 1989) често се смята за архетипна средиземноморска диета. Интересното е, че този период съвпада с голямата миграция от Гърция към Австралия. Гръцките мигранти в Мелбърн също имат относително ниска смъртност от коронарна смъртност, въпреки високото разпространение на рискови фактори като затлъстяване, диабет, хипертония и тютюнопушене (Young, 1992; Австралийско статистическо бюро, 1998), и това население запазва много аспекти на традиционните Критска диета (Kouris-Blazos et al., 1996). Смята се, че диетичните антиоксидантни съединения осигуряват поне част от защитата, свързана с диета, богата на зеленчуци, плодове и зехтин, като критската средиземноморска диета (Simopoulos & Sidossis, 2000; Visioli, 2000). Някои епидемиологични проучвания установяват обратна връзка между приема на храна или плазмените концентрации на каротеноиди от плодове и зеленчуци и честотата на ИБС (Gey et al., 1993; Kohlmeier et al., 1997).

В миналото ние идентифицирахме по-високи циркулиращи концентрации на някои каротеноиди и някои неидентифицирани съединения сред гръцките мигранти в сравнение с австралийците в Мелбърнското съвместно кохортно проучване (MCCS; Su et al., 1998). Възможно е по-високите концентрации на някои от тези каротеноиди сред гръцките мигранти да са причинени от по-висок прием на някои компоненти от средиземноморската диета, като диви тъмнозелени зеленчуци, смокини, маслини, лозови листа и други зелени листни зеленчуци, които не са нормални . консумиран от австралийци от англо-келтски произход. Тези храни не бяха добре характеризирани поради съдържанието на каротеноиди. Целта на това проучване е да се отделят и количествено определят каротеноидите в няколко диви зеленчука, смокини и зехтин, които са част от традиционната гръцка диета и които могат да допринесат за високи нива на циркулиращ каротеноид при гръцките мигранти.

методи

Прием на храна

Приемът на живи и предлагани на пазара зелени листни зеленчуци, смокини и зехтин в диетата се определя въз основа на въпросник за честотата на хранене (Ireland et al., 1994) сред гръцки мигранти и родени в Австралия (предимно англо-келтски) хора от MCCS (Giles)., 1990). MCCS е базирано в общността проспективно проучване, изследващо ролята на храненето при хронични заболявания, което включва голям брой мигранти от Южна Европа. Данните са изразени като услуга на човек на седмица (или мл на седмица за зехтин). „Сервитьорка“ от зеленчуци се определяше като „половин чаша варени зеленчуци или една чаша зеленчукови салати“. Порцията смокини е 140 g.

Реактиви и материали

Магнезиев карбонат, безводен натриев сулфат, бутилиран хидрокситолуен (BHT) и референтни проби от изцяло транс-β-каротин, изцяло транс-α-каротин и транс-гликоен са закупени от Sigma-Aldrich Pty Ltd (Castle Hill, NSW Австралия). Лутеин, зеаксантин и р-криптоксантин са дарения от Hoffmann-LaRoche (Базел, Швейцария). Β-Апо-8-каротенал (транс) (Fluka Chemical Corp.) се използва като вътрешен стандарт. HPLC разтворители и други реагенти са получени на местно ниво от търговски доставчици (Mallinkrodt, Selby-Biolab; Melbourne, Australia).

Сурови зеленчуци и плодове и зехтин

Дивите тъмнозелени зеленчуци (магарешки бодил, глухарче, амарант, тученица) бяха събрани от пътищата и градините на Мелбърн през февруари (лятото). Източниците бяха тези, които обикновено се предлагат за събиране на растения за консумация. Търговските листни зеленчуци (цикория, ендивия) са получени от Oakleigh Market (Виктория, Австралия). През април в местна градина бяха събрани пресни пресни смокини. Всички проби се съхраняват в найлонови торбички и се съхраняват в тъмен хладилник при 4 ° C до анализ (в рамките на 24 часа). Пробите бяха взети както обикновено се консумират и цялата проба беше анализирана. При дивозелените плодове ядливата част съдържа само листа. Екстра върджин зехтин (естествено студено пресован) се доставя от Picuba Foods, Marrickville, NSW (екстра върджин зехтин Minos, внос от Гърция). Зехтинът "Extra light" е получен от местен супермаркет (Bertolli "Extra Light", внос от Италия от Bertolli Australia Pty Ltd).

Приготвяне и извличане на проби от храни

За анализ на зехтина се смесват 1 g зехтин и 1 ml вътрешен стандарт, след това магнезиев карбонат (0,1 g) и 10 ml хлороформ: метанол (2: 1). Разтворът се държи на тъмно в продължение на 30 минути, прехвърля се в делителна фуния и се промива с вода (2 х 20 ml) за отстраняване на водоразтворимите материали. Органичната фаза се отделя и към водната фаза се добавят 10 ml хлороформ: метанол (2: 1) за по-нататъшна екстракция. Органичните слоеве бяха комбинирани, изсушени и възстановени, както е описано по-горе.

Стандартна крива и хроматография

Използва се UV-видим спектрофотометър (Hewlett-Packard) за определяне на концентрацията на стандартните разтвори. Вътрешен стандарт β-апо-8-каротенал (транс) се приготвя с хексан, съдържащ 0,01% бутилиран хидрокситолуен (BHT) в кафява бутилка. За изходен разтвор на β- и α-каротин, транс-гликоен, лутеин, зеаксантин и β-криптоксантин като разтворител се използва n-хексан (0,01% BHT). Трансгликопенът се разтваря в 1 ml дихлорометан, който след това се разрежда с n-хексан, съдържащ 0,01% BHT. а- и у-токоферолът се разтварят в етанол. Стандартните криви за аналитите бяха генерирани въз основа на съотношението на концентрацията към площта на пика с вътрешния стандарт. Изчисляването на концентрациите на неидентифицирано съединение се извършва с помощта на стандартна крива лутеин/зеаксантин.

Използваната хроматографска система включва модул за разделяне Alliance 2690, детектор с фотодиодна решетка 996 и мениджър на софтуер за управление на PDA на Millennium Chromatography (Waters Australia, Melbourne, Australia); Колона Spherisorb ODS-2 (250 х 4,6 мм; Goldpak, Великобритания), държач за патрон HP BIO и биосъвместима защитна касета (10 × 4,3 мм С18; Activon, Мелбърн, Австралия). Използва се подвижна фаза ацетонитрил: метанол: хлороформ (45:45:10), съдържаща 0,05% амониев ацетат в метанол и 0,1% триетиламин в ацетонитрил при скорост на потока 1,0 ml/min. Времето за работа беше 24 минути. Отделни каротеноиди (лутеин, зеаксантин, β-криптоксантин, ликопен, β- и α-каротин) се наблюдават при 450 nm. Коефициентът на вариация през деня е бил 8, 7, 7, 8, 10, 3, 8, 4 и 6,9% за лутеин, криптоксантин, ликопен, а-каротин и β-каротин. Границата на откриване, дефинирана като пикова височина, три пъти по-голяма от средния фонов шум (Shah et al., 1991), беше по-малка от 1 ng (съответстваща на концентрация на храна от приблизително 0,4 ug/100 g) за всички аналити.

резултатът

Прием на храна

Таблица 1 показва приема на зелени листни зеленчуци, смокини и зехтин в храни от гръцки и австралийски семейства, взети от MCCS. Зелените листни зеленчуци (включително анализирани тук диви и търговски видове) се консумират около два пъти по-често сред ражданията в Гърция в сравнение с ражданията в Австралия. Никой от анкетираните австралийци не съобщава, че яде смокини. Консумацията на зехтин е била повече от три пъти по-висока от тази на хората, родени в Австралия.

Маса в пълен размер

Откриване и количествено определяне на каротеноиди и токофероли в зелени зеленчуци, смокини и зехтин

Фигура 1 показва хроматографските профили на дивозелените зеленчуци (соец, амарант, тученица и глухарче). Лутеинът и β-каротинът са основните идентифицирани върхове. Хроматограмите на предлаганите в търговската мрежа видове (цикория и ендивия) са качествено сходни (не са показани). Имаше високи концентрации на лутеин и β-каротин в дивите тъмнозелени зеленчуци (Таблица 2). Магарешкият бодил и амарантът имат по-високи нива на лутеин, отколкото пробите от цикория и ендивия. Тученицата и глухарчето също съдържаха значителни количества лутеин. Каротеноидите, присъстващи в смокините, включват лутеин, криптоксантин, ликопен, β-каротин и α-каротин. Най-разпространеният каротеноид е ликопенът (Таблица 2), последван от лутеин и β-каротин. Екстра върджин зехтинът съдържа лутеин и β-каротин. Други каротиноиди не се откриват. Изключително лекият зехтин не съдържа откриваеми нива на каротеноиди, но има по-високо съдържание на а-токоферол, отколкото зехтинът екстра върджин.

идентифициране

Хроматографски профили на дивозелени зеленчуци. е вътрешен стандарт; U1 - U9, неидентифицирани съединения 1–9.

Изображение в пълен размер

Маса в пълен размер

Характеризиране и количествено определяне на неидентифицирани съединения

Няколко неидентифицирани съединения присъстваха в зелените листни зеленчуци. Основните върхове, общи за всички изследвани зеленолистни зеленчуци, се елуират на 4, 3, 4, 8 и 11 минути, а четвъртият настъпва на 15 минути за всички видове (включително цикория и ендивия) с изключение на тученица (Фигура 1). Тученицата показа голям пик на 18 минути, който не се появи при други видове (Фигура 1). Фигура 2 показва UV-видимите спектри в ацетонитрил: метанол: хлороформ (45:45:10) на основните неидентифицирани пикове. Не сме наблюдавали нито едно от тези съединения в плазмени проби, включително тези от повече от 200 гръцки хора, родени в Гърция (Su et al, непубликувани данни). Таблица 3 показва максимумите на абсорбция и концентрациите на неидентифицирани съединения в дивите и зелените листни зеленчуци. Съединение U5 присъства в значителни количества във всички видове, но във форсулата. Неизвестни съединения, присъстващи в зелени листни зеленчуци, не се появяват в откриваеми количества в смокини или зехтин.

Абсорбционни спектри на основните неидентифицирани върхове в дивите зеленчуци.

Изображение в пълен размер

Маса в пълен размер

дискусия

Открихме екстра върджин зехтин (студено пресован), който съдържа лутеин и β-каротин, както и значителни количества α- и γ-токоферол. По-рафинираният "изключително лек" зехтин не съдържа каротеноиди в количества, откриваеми по нашия метод. Лутеин (0,3 mg/100 ml) и β-каротин (0,07 mg/100 ml) са идентифицирани в екстра върджин зехтин, използвайки колориметричен метод (Ranalli et al, 1999b). Тези резултати са сходни за лутеина, но съдържанието на β-каротин е по-ниско, отколкото установихме. Това може да е реална разлика поради разнообразие от маслини или сезонни/климатични ефекти или може да е артефакт поради методологични разлики. Други проучвания са идентифицирали диапазон от съдържание на α-токоферол, идентичен с този, идентифициран в това проучване (García et al., 1996; Gutiérrez et al., 1999; Ranalli et al., 1999a).

Ограничението на това проучване е малкият брой анализирани проби от храна и едно време за вземане на проби. Що се отнася до времето на събиране, тези храни обикновено се консумират само в определени периоди от годината, когато са в сезон, особено за амарант, шунка и смокини, а пробите, използвани в това проучване, са били събрани по това време. Следователно измереното съдържание на каротеноиди е от значение за тези, които обикновено се консумират. За да се оцени правилно биологичната изменчивост на съдържанието на каротеноиди в тези храни, е необходима систематична стратегия за вземане на проби, която включва редица географски и (микро) климатични условия, но е извън обхвата на това проучване. Каротеноидният профил на зеленчуците е много по-сложен от установения по-рано, като делът и формите се срещат като различни каротеноиди, вариращи значително в зависимост от растежа, съхранението и преработката (Nyambaka & Ryley, 1995). Забележително е, че дивите зелени зеленчуци, описани в този документ, обикновено се събират и консумират в рамките на няколко часа. Допълнителни подробни проучвания на тези аспекти са оправдани.

И накрая, открихме високи концентрации на лутеин и β-каротин в дивите зеленчуци, които обикновено се консумират като част от традиционната средиземноморска диета. Фигурките и екстра върджин зехтинът също са важни източници на каротеноиди в такава диета.

Благодаря

Тази работа е финансирана главно от безвъзмездна помощ от Националния съвет по здравеопазване и медицински изследвания на Австралия (№ 974098). Авторите благодарят на Dr. Рейчъл Стоуни и помощта, предоставена от Мери Каймакамис и Мелиса Камерън.