ключови

  • елементи
  • абстрактно
  • Въведение
  • Материали и методи
  • Източник и обработка на тъкани
  • имунохистохимия
  • Източник на антитела
  • резултатът
  • Имунолокализация на PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS и виментин в човешки клитор
  • дискусия

елементи

  • Клетъчна сигнализация
  • изоензими
  • мускул
  • Репродуктивна биология

абстрактно

Материали и методи

Източник и обработка на тъкани

В съответствие с разпоредбите на местната комисия по етика на Медицинския факултет в Хановер, клиторната тъкан от средната до проксималната част е получена в рамките на 4-6 часа след смъртта на четири мъртви жени (на възраст от 18 до 42 години). Субектите нямат известна история на заболявания, свързани със сексуална дисфункция. След изрязване тъканните проби веднага се поставят в ледено студен разтвор на 4% формалдехид във фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS; рН 7,4).

имунохистохимия

Пробите от клиторни тъкани се фиксират чрез потапяне за 4 часа в ледено студен разтвор на 4% формалдехид в PBS (рН 7, 4) и се изплакват три пъти в продължение на 24 часа с ледено студен PBS, съдържащ 15% захароза. Пробите бяха поставени в Tissue-Tec (Miles Laboratories, Elkhart, IN, USA) и след това бързо замразени в изопентан при -40 ° С. Тъканта беше нарязана на филийки с дебелина 8-10 μm и размразени върху стъклени стъкла. Секциите се инкубират в продължение на 2 часа в PBS, допълнени с 0,2% Triton X-100 и 1% говежди серумен албумин, последвано от инкубация в продължение на 24 часа (при стайна температура) с първични антитела (anti-eNOS, -sm α-актин). PDE2, -PDE5, -cGK и -vimentin) в правилното разреждане (анти-α-актин: 1: 400, анти-eNOS: 1: 1000, анти-PDE2/PDE5: 1: 250, анти-cGK: 1: 250, анти-виментин: 1:40). След изплакване на срезите с PBS се прилагат или флуоресцеин изотиоцианат, или маркирани с Тексас червени вторични антитела (1:80 и 1: 160 разреждания) и срезите се инкубират в продължение на 2 часа. След това срезовете бяха комбинирани с фенилендиамин. Визуализацията е стартирана с лазерен микроскоп (Olympus, Токио, Япония) и изображенията са извършени с помощта на ViewFinder Lite (версия 2.0, Pixera, Egham, UK).

Източник на антитела

Антитела, насочени срещу PDE2A, PDE5A и PDE11A, са закупени от FabGennix (Frisco, TX, USA), анти-cGKI AB е от Calbiochem (La Jolla, CA, USA), α-гладък мускул актин, -vimentin и - eNOS антителата са от Sigma BioSciences (Сейнт Луис, Мисури, САЩ). F (ab) 2 фрагмента, конюгирани с Texas Red и Fluorescein са получени от Jackson Immunoresearch Laboratories (West Grove, PA, USA).

резултатът

Имунолокализация на PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS и виментин в човешки клитор

( а - е ) Лазерна флуоресцентна микроскопия: експресия на цикличен гуанозин монофосфат (GMP) фосфодиестераза (PDE) 2 (цикличен аденозин монофосфат (AMP) PDE, стимулиран от цикличен GMP; а ), фосфодиестераза (PDE) 5 (цикличен GMP) PDE; б ) оцветени спрямо α-гладък мускул актин ( ° С ), тип I протеин киназа (cGKI, циклична GMP-свързваща протеин киназа; д ) и ендотелна азотна оксидна синтаза (eNOS; д ) в малки съдове, които разпръскват субепителното пространство и кавернозното тяло на клитора (увеличение × 40). е ) Микрография на клиторална тъкан, представляваща имуномаркиране за PDE11A (двоен субстрат PDE) в нервен ствол, разположен в стромата (увеличение × 100). Вложки с букви б ), д ), е ): контролно оцветяване без пропускане на първични антитела (увеличение × 40).

Изображение в пълен размер

( а - ° С ) Клетки, подобни на т.нар интерстициални клетки (IC), представящи имуносигнали, специфични за цикличен гуанозин монофосфат (GMP), свързваща фосфодиестераза (PDE) 2 (цикличен аденозин монофосфат (AMP) PDE) в базалния епител на човешки клитор. Увеличение: × 10 ( а ), × 20 ( б ), × 100 ( ° С ). б ) Издухано изображение на рамкираната област, показано в писмото а ), ° С ) издухано изображение на рамкираната област, представено в писмото б ). Поставете в ( б ): контролен цвят (увеличение × 40).

Изображение в пълен размер

а - ° С ) Подробности за базалния епител на човешкия клитор: интерстициални клетъчни клетки (IC), които показват богата фосфодиестераза (PDE) имунооцветяваща в клетъчните си тела и влакна. Увеличение: × 20 ( а ), × 100 ( б ). б ) Издухващо изображение на IC-подобна клетка, представено в а ). Експресия на виментин ( ° С ) в клетката да бъде IC в субепидермалния слой (увеличение × 100). Поставете в ° С ): контролен цвят (увеличение × 40).

Изображение в пълен размер

Маса в пълен размер

дискусия

Въпреки че се смята, че клиторът е свързан с нормалното развитие на женския цикъл на сексуална възбуда и оргазмична фаза, много малко изследвания са изследвали физиологията на този генитален орган. 5, 6, 7 Въз основа на тези констатации се предлага ролята на NO/цикличната GMP система в процеса на женска сексуална възбуда. Установена е централната роля на цикличния AMP и цикличните изоензими GMP и PDE в контрола на различни тъканни функции и фармакологичната концепция за увеличаване на цикличните нива на нуклеотиди в тъканите, например със селективни PDE инхибитори, за лечение на заболявания Урогениталния тракт), уринарна инконтиненция, симптоми на т.нар доброкачествен простатен синдром, включително симптоми на долните пикочни пътища и запушване на изхода на пикочния мехур. 18, 19, 20 Въз основа на хипотезата, че отговорът на сексуалната стимулация при жените се медиира отчасти по същите биологични пътища като при мъжете, беше преценено дали употребата на PDE инхибитори може също да улесни гениталиите на жените. релаксация на гладката мускулатура, водеща до подобрена субнормална възбуда. 21.

И накрая, резултатите подкрепят ролята на цикличното сигнализиране на GMP и свързаните с него циклични cGMP-свързващи протеини, като PDE2, PDE5 и cGKI, за контролиране на клиторния поток. Освен това изглежда вероятно PDE2 и PDE11 също да участват в механизма на локално (невро) предаване в клитора.