Snow UNIVERSITY НА ТЕХНОЛОГИЯ BRN UNIVERSITY F TECHNLGY Химически факултет Факултет по химия PTRAVIN А BITECHNLGIÍ факултет F ХИМИЯ ИНСТИТУТ F FD SCIENCE И BITECHNLGY IZLACE BSAHVÝCH S CANNABIS SATIVA И ANTIFLGISTICKÝ ЕФЕКТ ISLATIN F CMPUNDS СДС CANNABIS SATIVA И ТЯХНОТО АНТИ-INFLAMMATRY ЕФЕКТ DIPLMVÁ РАБОТА MASTER S ТЕЗА AUTR PRÁCE Bc. ZUZANA BARANVÁ НАДЗОР НА АУТР PharmDr. Daniela VESELÁ SUPERVISR BRN 2015

безплатно

Технологичен университет в Бърно Химически факултет Purkyňova 464/118, 61200 Бърно 12 Формуляр за задание на магистърска теза Номер на магистърска теза: FCH-DIP0892/2014 Академична година: 2014/2015 Катедра: Катедра по хранителна химия и биотехнологии Студент: Bc. Zuzana Baranová Дипломна програма: Хранителна химия и технологии (N2901) Област на изследване: Хранителна химия и биотехнологии (2901T010) Ръководител на дипломна работа PharmDr.Daniela Veselá Консултанти: док. Ing. Ирина Мелкова, CSc. Заглавие на дипломна работа: Изолиране на съставките на Cannabis sativa и техния антифлогичен ефект Задание на дипломна работа: 1. Изготвяне на литературен преглед на изданието 2. Описване на използваните методи за оценка 3. Обработка на измерените резултати от експерименти 4. Оценяване на получените резултати форма на дискусия 11.5.2015 Дипломната работа се подава в броя, определен от декана в секретариата на катедрата и в електронен вид на ръководителя на дипломната работа. Това задание е приложение към дипломната работа. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Bc. Zuzana Baranová PharmDr.Daniela Veselá проф. RNDr. Ивана Марова, CSc. Директор на студентска дисертация Директор на Института в Бърно, на 30.1.2015 г. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - проф. Ing. Мартин Вайтер, д-р Декан на факултета

BARANVÁ, Z. Изолиране на съставките на Cannabis sativa и техният антифлогичен ефект. Бърно: Технологичен университет в Бърно, Химически факултет, 2015. 73 с. Дисертационен ръководител PharmDr. Даниела Весела. ДЕКЛАРАЦИЯ Декларирам, че съм подготвил дипломната работа самостоятелно и че съм цитирал правилно и изцяло всички използвани литературни източници. По съдържание дипломната работа е собственост на Химическия факултет, Технологичен университет в Бърно и може да се използва за търговски цели само със съгласието на ръководителя на дипломната работа и декана на FCH, НО. подпис на студента Благодарности: Бих искал да благодаря на PharmDr. Даниел Веселей за времето, което тя ми отдели, и съветите, които ме развълнуваха при разработването на дипломната ми работа. Благодаря и на RNDr. Д-р Ян Хошек, който ме придружи при измерването на противовъзпалителната активност и ме запозна с проблема. 4

4.1.6 Разделяне на фракциите. 47 4.2 Идентификация. 52 4.2.1 Анализ на UV спектрите. 52 4.2.2 Анализ на IR спектъра. 53 4.2.3 Идентификация чрез ЯМР. 54 4.2.4 Резултати от идентифицирането на изолирани вещества. 55 4.3 Приготвяне на THP1 клетки. 56 4.3.1 Методи. 56 5 Заключение. 60 6 Цитирана литература. 63 7 Списък на съкращенията. 71 6

Флавон апигенин лутеолин 5,7,4'-Н 5,7,3 ', 4'-Н Флавонол кемпферол морин кверцетин рутин 3,5,7,4'-Н 3,7,2', 4 ', 5'- Н 3,5,7,3 ', 4'-Н 5,7,3', 4'-Н; 3- R2 Флаванон (дихидрофлавон) хесперидин нарингенин таксифолин 5,7,3 ', 4'-Н 5,7,4'-Н 3,5,7,3', 4'-Н Изофлавон генистин 5,4'-Н; 7- R3 Антоцианин апигенидин цианидин 5,7,4'-Н 3,5,7,4'-Н; 3,5-СН3 * халкон трихидроксихалкон 2,4,2'-Н R1: галат; R2: рамноглюкоза; R3: глюкоза * Халконите са предшественици на флавоноидите, но някои автори ги класифицират в цялостното разделяне на флавоноидите на групи [10]. 2.4.1 Основни подгрупи на флавоноидите 2.4.1.1 Халкони Халконите са предшественици на флавоноидите. Те се характеризират с липсата на С-пръстен в основната структура на флавоноидния скелет. Следователно те също се наричат ​​флавоноиди с отворена верига. Халконите включват например флоридзин, флоретин и халкоренанин. Те се намират в значителни количества в домати, круши, ягоди и някои продукти от фибри. Халконите и техните производни заслужават внимание поради многобройните си хранителни и биологични ползи [11,12]. Фигурата под абзаца (вж. Фигура 2) показва основната структура, от която са получени всички халкони. Chalkón brázok č. 2: Основна структура на халкон 11

H H H H Кверцетин H 2.8.1.9 Vitexin brázok č. 16: Структура на кверцетин витексин (вж. Фигура 17), категоризиран като флавоноиден С-глюкозид. In vivo метаболизмът на витексин се оценява при плъхове. Витексин индуцира апоптоза и потиска растежа на туморните клетки, има потенциален антиоксидантен ефект и може ефективно да се използва за предотвратяване на нежелани кожни реакции, предизвикани от UV лъчение като производство на свободни радикали и увреждане на кожните клетки [54,55]. Витексин има потенциален хипотензивен ефект поради ганглиозна блокада. Има значителен защитен ефект срещу наранявания на миокарда. Противовъзпалителният ефект е показан въз основа на неговите антихистаминови, антибрадикининови и антисеротонинови свойства. Други клинични приложения включват антивирусна, антитиреоидна, антисклеротична и антихепатотоксична активност. Способността на витексин да инхибира супероксидните радикали води до потенциалното прилагане на неговия анти-стареещ ефект в козметичната индустрия [54,55]. Витексин, заедно с изовитексин, прилаган през устата, значително намалява кръвната захар след хранене. те стимулират секрецията на инсулин и инхибират α-глюкозидазата, като по този начин помагат на пациенти, страдащи от диабет [54,55]. H H H H H H Hite Hite Vitexin no. 17: Структура на витексин 29

Разклащайки на различни разтворители, разделих веществата на 4 порции. Порциите се изпаряват на изпарител или се лиофилизират в случай на вода и полученото сухо вещество се претегля. 3.2.1.2 Химикали Клас на градиент на ацетонитрил (Scharlau) Бензен p.a. (Penta) Хлороформ p.a. (Пента) Етил ацетат p.a. (Penta) оцетна киселина p.a. (Penta) Метанол p.a. (Penta) Метанолов градиент (Scharlau) Вода за HPLC, приготвена с помощта на апарата отдолу. Рециклирана смес, съставена от приблизително 10% вода, 10% метанол и 80% ацетонитрил cm 20 cm, дебелина на слоя 0,2 mm (Merck) аналитична колона: Acentis Express C8, 15 cm 2,1 mm, размер на частиците 2,7 μm подготвителна колона: Supelcosil TM LC-8 SEMI-PREP, 25 cm 10 mm, размер на частиците 5 µm опаковка на колона: Силикагел Sigma-Aldrich 60 Å, размер на частиците 0,04 0,63 mm 3.2.1.4 Апарат Вакуумен ротационен изпарител Лиофилизатор BŰCHI Waterbath B-480, Rotavapor R-114 (Büchi, Швейцария) BŰCHI Вакуумна помпа V- 700, Вакуумен контролер V-850, Rotavapor R-3 (Bűchi, Швейцария) CHRIST Alfa 1 2 LD (Христос, Германия) 31

Колонна хроматография Стационарна фаза: Подвижна фаза: силикагел с размер на зърната 0,040 0,063 mm хлороформ, бензен, метанол в съотношение 7: 2: 1 (v/v/v) Процедура: Фракциите от хлороформната фракция се събират приблизително Фракции от 100 150 ml, фракции от хексан в около 40 до 50 ml, след което се анализират чрез TLC и HPLC. Въз основа на сходството на състава, те се комбинират и след това се изпаряват във вакуумен изпарител. Аналитичен инструмент за високоефективна течна хроматография (HPLC): Agilent 1100, UV детектор DAD Стационарна фаза: Acentis Express C8, 15 cm 2,1 mm, размер на частиците 2,7 μm Елуиране: градиент Подвижна фаза: Метод 1: 0. минута: 50% MeCN, 50 % HCH (0,2%) 24-та минута: 83% MeCN, 17% HCH (0,2%) 24,1. минута: 100% MeCN Поток: 0,3 ml/min инжекционен обем: 1 μl Температура на колоната: 40 C Откриване: UV при дължини на вълните λ 254 и 280 nm Полупродуктивна високоефективна течна хроматография (HPLC) Инструмент: YL9100 HPLC Система Стационарна фаза: Acentis Express C8, 25 cm 10 mm, размер на частиците 5 µm Елуиране: градиент Подвижна фаза: Метод 2: 0. минута: 90% рециклирано, 10% HCH (0.2%) 15-та минута: 95% рециклирано, 5% HCH (0.2%) 15.01. минута: 100% ACN 25.01. минута: 100% MeH 40.01. минута: 90% рециклирано, 10% HCH (0,2%) Дебит: 5 ml/min инжекционен обем: 25 μl Температура на колоната: 40 C Откриване: UV при дължина на вълната λ 254 и 280 nm 33

3.2.2.2 Идентификация UV спектрофотометрия UV спектрите на изолираните вещества бяха измерени с помощта на Agilent DAD UV/VIS инструмент заедно с HPLC анализ. Тези спектри бяха използвани за оценка на структурата на съединенията. Резултатите бяха сравнени с UV спектрите, базирани в училищната база данни на VFU в Бърно. IR спектрофотометрия IR спектрите бяха измерени с помощта на Nicolet Impact 400D FT-IR инструмент, като зависимостта на пропускливостта от дължината на лъчевата вълна. Пробите се измерват в твърда форма по метода ATR. За измерване на спектъра бяха приложени ATR корекция, корекция за H2 и C2 и автоматично изглаждане на спектъра. Чрез оценка на спектрите беше получена информация за наличието на различни функционални групи в структурата на анализираната проба. Анализът на ядрено-магнитния резонанс чрез ядрено-магнитен резонанс е извършен в чужбина в Университета в Мисисипи. 34