атеросклерозата

  • абстрактно
  • Основното
  • РЕЗУЛТАТИТЕ
  • Процедура за установени атеросклеротични лезии
  • Плазмени липиди
  • Дейности на MMP и TIMP в аортни екстракти Ex Vivo
  • Активност на ММР в моноцити инвитро а Ex Vivo
  • TNFa - индуцирано активиране на NF-kB и MAPK
  • ДИСКУСИЯ

абстрактно

Основното

Хепаринът и хепариноподобните молекули намаляват клетъчната пролиферация, увеличават нетното производство на извънклетъчен матрикс в няколко клетъчни типа и намаляват секрецията на матрични металопротеинази (MMP) in vitro. 1, 2, 3, 4 Натрупването на получени от макрофаги пенопластни клетки в атеросклеротични плаки корелира с повишено освобождаване на тумор некротизиращ фактор α (TNFα) и MMPs, 5, 6, което може да повлияе на съдовата ремоделиране и руптура на плаката, като по този начин ускорява остри усложнения като като нестабилна ангина пекторис и остър миокарден инфаркт. 7, 8, 9, 10, 11

Пентозан полисулфатът (PPS) е перорален хепариноидоподобен препарат, който по същество няма антикоагулантна активност и е одобрен за лечение на интерстициален цистит. По-рано установихме, че лечението с PPS предотвратява развитието на хронични възпалителни лезии и хистологични лезии при 5/6 нефректомирани плъхове. 13 Също така установихме, че PPS in vitro намалява пролиферацията на мезангиални клетки, 14 човешки съдови гладкомускулни клетки, получени от съдови присадки, 15 и гладки мускулни клетки, получени от простатен интерстициум. 16 В допълнение, PPS увеличава секрецията на MMP-2 и стимулира производството на тъканния инхибитор на металопротеиназа (TIMP) -1 и секрецията на TIMP-3 от мезангиалната клетъчна повърхност. 14.

В това проучване ние изследвахме ефекта от пероралното лечение с PPS върху прогресията на установените атеросклеротични лезии при херанабе наследени хиперлипидемични (WHHL) зайци. 17 Изследвахме ефекта на PPS върху доказани атеросклеротични лезии като най-клинично значимия и строг тест за ефективност на PPS.

РЕЗУЛТАТИТЕ

Процедура за установени атеросклеротични лезии

Анализ на атеросклеротични лезии при херанабски наследствени хиперлипидемични (WHHL) зайци. Животните бяха хранени с диета с висок холестерол (HC) в продължение на 75 дни. След 45 дни те бяха рандомизирани в две групи, като едната получаваше пентозан полисулфат (PPS) (30 mg/kg телесно тегло (BW) дневно) в питейна вода, а другата получаваше само чешмяна вода, както е описано подробно в Материали и методи., а а б ) Представителни снимки на вътрешната повърхност на аортата след 75 дни HC-диета. Получени са изображения от аорти, прясно нарязани от перфузионни зайци, фиксирани с 4% фосфатно буфериран разтвор на формалдехид (пет на група). а ) HC-диета за 75 дни плюс чешмяна вода. ( б ) HC-диета за 75 дни и на ден 45 PPS се добавя към питейната вода и продължава още 30 дни. ( ° С ) Количествено определяне на атеросклеротични лезии при WHHL зайци чрез анализ на лицето при WHHL зайци. Атералната атеросклероза се оценява като процент на площта на интимната лезия (площ на лезията/обща повърхност) между аортния произход и бъбреците. * P * P ** P

Активност на матричната металопротеиназа (ММР) в моноцити - макрофаги. Човешки промоноцитни клетки U937 или човешки периферни кръвни моноцити (PBM) в среда RPMI, допълнена с 10% фетален говежди серум (FBS), бяха стимулирани с 10 ng/ml тумор некротизиращ фактор α (TNFα), в присъствие или отсъствие. пентозан полисулфат (PPS) (100 μg/ml) или хепарин (100 μg/ml), инкубирани при 37 ° C в продължение на 3 часа и след това в среда без 0,1% говежди серумен албумин (BSA) за 16 часа -18 часа, както е описано подробно в Материали и методи. а ) Представителен зимографски анализ на клетъчни супернатанти U937. ( б Активността на MMP-2 се определя количествено чрез денситометрия в супернатантите на нестимулирани U937 клетки. Отворена лента, немодифицирана; напълнена пръчка, обработка със 100 μg/ml PPS. Данните се изразяват като процент от контрола (нестимулирани клетки U937). Показани са средно ± sem от пет независими експеримента. ** P * P ** P * P ** P

Модулация на митоген-активирана протеинкиназа (MAPK) и активиране на ядрен фактор-кВ (NF-кВ) в RAW клетки. ( а RAW клетките се третират с туморен фактор на некроза α (TNFα) (10 ng/ml) в присъствието или отсъствието на пентозан полисулфат (PPS) (400 μg/ml) и нивата на фосфорилирани и общи JNK, IκB и p38 се определят от Western blots . Същите мембрани бяха тествани с ß-актин за оценка на протеиновото натоварване. Относителна експресия на p-JNK, piK, p-p38 върху β-актин ( б - д ); # P * P ¶ P 13, 24, 25 Следователно може да се заключи, че инхибирането на прогресията на атеросклерозата, индуцирано от PPS лечение при WHHL зайци, не се медиира от намаляване на нивата на кръвното налягане.

Използването на хепарин и подобни на хепарин молекули е предложено по-рано като лечение на атеросклероза. 1 Изискването за парентерално приложение обаче ограничава употребата им до това показание, което не се отнася за операторите на преносни системи. Пероралният PPS се използва широко за лечение на интерстициален цистит. Той има много малко токсични странични ефекти, дори когато се прилага за дълъг период от време. Лечението с PPS предотвратява развитието на гломерулни и съдови лезии и тубулоинтерстициално възпаление и фиброза при индуциран от стрептозотоцин диабет, 27 bGH трансгенни мишки, 27 и плъхове с нефропатия A 28 или 5/6 циклоспорин А, 13 намалява симптомите на възпалителен артрит, миокардна исхемия/модели на реперфузионно нараняване. 30

Точният механизъм, чрез който ОПС постигат своите защитни ефекти, все още не е изяснен. Установихме, че атеросклеротичните плаки при лекувани с PHL зайци WHHL съдържат по-малко макрофаги, отколкото при контролите, третирани с вода. Други са показали, че PPS и хепаринът инхибират активирането на каскадата на комплемента, 31 свързва или измества възпалителните цитокини, 32 намалява активирането на NF-κB, 33 изчиства свободните радикали, 31 и намалява адхезията и инфилтрацията на неутрофилите. 30 Тези механизми могат директно да допринесат за намаляване на набирането на макрофаги и подобряване на развитието и стабилността на плаките.

Предишни доклади корелират повишената активност на ММР с моноцитни макрофаги с развитието на остри усложнения като руптура на плака и тромбоза. 5, 6, 7, 8, 9, 10, 33 Установихме, че PPS инхибира както MMP-2, така и MMP-9 ензимната активност в два вида човешки моноцити, промоноцитни клетъчни линии (U937 клетки) и PBM от нормални доброволци. За допълнително потвърждаване на тази хипотеза, ние изследвахме активността на MMPs в индуцирани перитонеални макрофаги, получени от мишки, лекувани орално с PPS. При тези животни, стимулираната от TNFa активност на MMP е значително намалена след лечение с PPS в сравнение с контролните животни, което предполага, че този механизъм може да присъства in vivo. Тъй като концентрациите, използвани в експериментите in vitro, са били близки до плазмените нива, достигнати in vivo след перорално приложение на PPS, 27, това съединение може да има терапевтично приложение при хората при тези болестни процеси. Инхибиторната активност на PPS върху MMP все още е значителна, когато лекарството се прилага до 3 часа след TNFa стимулация.

По-рано е показано, че възпалителните медиатори като TNFα играят активна роля в прогресията на атеросклерозата. Важен механизъм, чрез който TNFα увеличава възпалението, е повишената регулация на провъзпалителните гени в макрофагите. 44 Тъй като установихме, че PPS потиска стимулираното от TNFα фосфорилиране на IkB, транскрипцията на NF-кВ и фосфорилирането на p38, възможно е PPS да намали директно индуцираната от TNFα активност, индуцирана от TNF, и индуцираната от TNFα AP-1. Констатацията, че PPS намалява TNFα, MCP-1, ICAM-1 и CXCL-1-стимулирана експресия на iNOS mRNA в бъбречни проксимални тубуларни клетки и подоцити чрез инхибиране на NF-kB индиректно подкрепя това разсъждение.

По този начин, благоприятните ефекти на PPS върху установени атеросклеротични лезии могат да включват стабилизиране на нивата на колаген в плаките, медиирани от модулация на активността на MMP и TIMP, намаляване на инфилтрацията на макрофаги в атеросклеротични плаки и инхибиране на възпалението на моноцити/макрофаги, проявяващо се с намалена активност на NMP и фосфорилиране на NMP стр. 38.

PPS също намалява свързването на ацетилирани липопротеини с ниска плътност към ендотелните клетки45 и селективно инактивира няколко хепарин-свързващи растежни фактора. В допълнение, PPS е отрицателно зареден и хидрофилен, две свойства, които подпомагат локализацията му на повърхността на ендотелните клетки и поддържането на гликаликсния "щит". 31

В заключение, пероралното приложение на PPS лечение забавя прогресията на установената атеросклероза при WHHL зайци. Ефектът на PPS изглежда е свързан със способността му да намалява възпалението, включително инфилтрация на макрофаги, и да регулира дейностите на MMP и TIMPs в атеросклеротичната аортна стена по начин, който благоприятства отлагането на колаген, а не разграждането на колагена. Тези свойства могат да поддържат стабилността на покритието. Лечението с PPS повишава активността на MMP-2 и TIMP в атеросклеротичната плака, като същевременно инхибира активността на MMP-2 и MMP-9 в моноцити/макрофаги. Необходими са допълнителни проучвания, за да се оцени значението на тези наблюдения при лечението на пациенти с установена атеросклероза.