абстрактно

Основното

Приблизително 5% от всички случаи на рак на гърдата са свързани със синдроми на наследствено предразположение и приблизително половината от тях са причинени от мутации в гените BRCA1 и BRCA2 (Hopper, 2001). Носителите на мутации в гените BRCA1 и BRCA2 имат до 90% риск през целия живот от рак на гърдата (Rebbeck, 2002) и за тези жени са необходими ефективни стратегии за превенция.

Материали и методи

елементи

Маса в пълен размер

Имплантиране на тъкани на гърдата в атимни голи мишки

Имунохистохимично определяне на пролиферацията и експресията на стероидни рецептори

Пролиферативната активност се оценява чрез имунохистохимия (IHC), използвайки мишо моноклонално антитяло MIB-1 (Coulter Ltd, UK), повдигнато срещу антиген, свързан с пролиферация на Ki67. Експресията на ERa и PgR се определя чрез IHC, като се използва миши моноклонално анти-ERα антитяло (клон ID5, Dako Ltd, Великобритания) и моноклонално анти-PR антитяло на плъх (клон KD68, Abbott Laboratories, UK). Методите и разрежданията на микровълновия антиген са описани по-горе (Clarke et al., 1997a). Свързването на антитела се открива непряко, като се използват подходящи биотинилирани втори антитела, конюгиран с пероксидаза комплекс авидин-биотин (ABC Elite, Vector Laboratories, UK) и диаминобензидин като хромоген. Количественото определяне на имунооцветяването се извършва на светлинен микроскоп и се ограничава до епителни клетки на лололоалвеоларни крайни канални единици. Площите, които трябва да бъдат преброени, бяха избрани извън фокуса при ниска мощност и след това бяха записани полета с пълна мощност. Оценяват се поне 1000 епителни клетки на проба и броят на белязаните клетки се изразява като процент от общия брой клетки. Интензивността на оцветяването не беше оценена.

Статистически методи

Данните са представени като медиани заедно със съответните интерквартилни диапазони (IQR). Общите промени между лечението или рисковите групи бяха анализирани с помощта на непараметричен, еднопосочен вариационен анализ на Kruskal-Wallis. Ако това се окаже значително на ниво 5%, тогава се извършват двойни сравнения с помощта на непараметричния U-тест на Ман-Уитни.

резултатът

Естрадиолът стимулира пролиферативната активност на епителните клетки на гърдата във всички рискови групи

Пролиферативна активност на нормален епител на гърдата, взет от жени в риск от рак на гърдата ( A ) при жени с висок риск ( Б. ) Всички носители на BRCA1 или BRCA2 мутация ( ° С ) и носители на мутация BRCA1 ( д ), които са имплантирани в атимични голи мишки преди (ден 0) и след 1 седмица лечение с контролни пелети от 0,5 mg Е2 или 2,0 mg Е2. Удебелените хоризонтални линии показват средни стойности, както и изображения над колоните, които показват IQR. Числата в скоби са броят на пробите, налични за анализ във всяка група, а стойностите P показват значимостта на разликите между групите на лечение чрез дисперсионен непараметричен анализ на Kruskal-Wallis. Ctrl = контрол.

Изображение в пълен размер

Индукцията на експресия на прогестеронови рецептори от естрадиол е нарушена в гръдната тъкан от носители на BRCA мутация

Не са наблюдавани значителни разлики в нивата на експресия на ERa и PgR на епителните клетки на гърдата между рисковите групи по време на събирането на тъканта от жените (Таблица 2). Въпреки това, 14 дни след имплантацията, нетретираните мишки показват значително намаляване на процента на PgR-положителни клетки във всички рискови групи (Таблица 3). Това е най-силно изразено в тъканни проби от жени с BRCA1 мутации и в резултат процентът на PgR-положителни клетки е приблизително четири пъти по-нисък, отколкото в групата с популационен риск (P

естрогени

Експресия на прогестеронови рецептори в нормален епител на гърдата, взета от жени с популационен риск от рак на гърдата, пациенти с висок риск и тези, носещи мутации BRCA1 и BRCA2, имплантирани в атимни голи мишки и лекувани в продължение на 1 седмица с контрол, ( A ), 0, 5 E2 ( Б. ) или 2,0 mg Е2 ( ° С ) -силастични пелети. Удебелените хоризонтални линии показват средни стойности, както и изображения над колоните, които показват IQR. Числата в скоби са броят на пробите, достъпни за анализ във всяка група, а стойностите P показват значимостта на разликите между рисковите групи чрез дисперсионния непараметричен анализ на Kruskal-Wallis. PgR рецептор = прогестерон; PR = риск за населението; HR = висок риск; Всички мутации = всички мутации; Само BRCA1 = само носители на мутация BRCA1 .

Изображение в пълен размер

Ефектите от високите дози E2 гранула върху експресията на PgR в човешкия епител на гърдата във всички времеви точки след началото на лечението са показани на Фигура 3. В тъканни проби от популационно-рисковата група, експресията на PgR е била максимална след 1 седмица. Лечението с висока доза пелети Е2 и това ниво се запазва през останалата част от експерименталния период. За разлика от това, отговорът в групата на всички мутации е отслабен, така че процентът на PgR-положителни клетки в пробите от тази група е значително по-нисък, отколкото в популацията на рисковата група, не само преди началото на лечението, но и след 2 седмици след лечението (P

Ефекти от лечението с Е2 с течение на времето върху експресията на прогестеронови рецептори в епитела на гърдата при жени с популационен риск от рак на гърдата (♦) в сравнение с жени с висок риск (▪) и лица с мутации BRCA1 и BRCA2 (▴). Средните стойности са представени с плътни символи, докато лентите за грешки показват IQR, а числата в скоби са проби, налични за анализ във всяка група. * P ** P *** P 1 ден-1 намалява експресията на Ki67 в тези три рискови групи в сравнение с 0,5 mg само Е2 (P -1 седмица -1) при популационен риск, повишен = риск и групи от всички мутации в сравнение до 0,5 mg само Е2 (Фигура 4А, В и С, Р

Нормална пролиферативна активност на гръдния епител, взета от жени с риск от рак на гърдата в популацията ( A ), високорискови хора Б. ), пациенти с BRCA1 и BRCA2 мутации ( ° С ) и носители на мутация BRCA1 ( д ) след имплантиране в атимното невъоръжено око на мишки и лечение с 0,5 mg Е2 за 1 седмица, последвано от 2 седмици Е2 в комбинация или с ТАМ, или с фулвестрант. Удебелените хоризонтални линии показват медиани, както и числа в горната част на колоните, обозначаващи IQR. Числата в скоби са броят на пробите, налични за анализ във всяка група на лечение, а стойностите на Р показват значимостта на разликите между групите на лечение чрез дисперсионен непараметричен анализ на Kruskal-Wallis. Ctrl = контрол; 0,5 mg E2 = обработка с 0,5 mg E2-силикатни пелети; ТАМ = тамоксифен (1 mg мишка-1 ден-1); FUL = фулвестрант (5 mg мишки -1 седмица -1).

Изображение в пълен размер

Също така беше изследвана способността на TAM и фулвестрант да обърнат ефектите от лечението с висока доза (2 mg) Е2 върху експресията на Ki67 на епителните клетки на гърдата (данните не са показани). И двата антиестрогена могат да намалят ефектите на Е2 върху пролиферацията във всички рискови групи, но ефектите им са доста променливи, тъй като серумните нива на лекарството, постигнати с горните режими на дозиране, не са достатъчни за преодоляване на високите плазмени нива на Е2, постигнати след лечение с 2 mg от Е2 пелети.

дискусия

В обобщение показахме, че стимулираната с Е2 пролиферация на гръден епител, взета от жени, носещи хетерозиготни мутации в гените BRCA1 и BRCA2, може да бъде обърната както от SERM (TAM), така и от антиестроген (фулвестрант), който няма агонистични ефекти. променената експресия на PgR е фенотип, свързан с мутации в гените BRCA1 и BRCA2. Ние заключаваме, че ранното антиестрогенно лечение трябва да бъде ефективно за предотвратяване на рак на гърдата при високорискови жени.

Благодаря

Това проучване е финансирано от Фонда за научни изследвания в болница "Кристи" и AstraZeneca Pharmaceuticals. Благодаря ви д-р Алън Уейкъл от Астразенека за предоставяне на фулвестранта, използван в това проучване, и Dr. Джон Койн (Университетска болница в Южен Манчестър) за съдействието му при хистологичното изследване на използваните проби.