биохимичните

  • елементи
  • абстрактно
  • Заден план:
  • методи:
  • резултатите:
  • заключение:
  • Основното
  • резултатът
  • Демография и хранене
  • Състояние на кобалтин и фолиева киселина за новородени
  • Хематологични параметри на кърмачета
  • дискусия
  • заключение
  • методи
  • Проучване на населението и дизайна
  • Вземане на кръв и биохимичен анализ
  • Статистически анализ
  • Отчет за финансова подкрепа
  • разкриване

елементи

  • анемия
  • биомаркери
  • Хранене
  • педиатрия

абстрактно

Заден план:

Докато дефицитът на желязо се счита за основна причина за анемия при кърмачета, дефицитът на кобаламин се характеризира предимно със забавяне на развитието и типичната макроцитна анемия в тази възрастова група е ограничена до тежък и дългосрочен дефицит на кобаламин. Хематологичните параметри са изследвани при 4-месечни деца с биохимични признаци на кобаламиново увреждане, които са участвали в рандомизирано контролирано интервенционно проучване на кобаламин в продължение на 6 седмици.

методи:

Сто и седем деца бяха разпределени на случаен принцип да инжектират интрамускулно с 400 μg кобаламин или без намеса на 6 седмици. Хематологичните параметри и състоянието на кобаламин и фолиева киселина бяха определени при включване и на 4 месеца.

резултатите:

Добавянето на кобаламин подобрява всички маркери за увреждане на кобаламина, но няма ефект върху броя на хематологичните клетки след 4 месеца (P> 0, 18). Симптомите на еритропоезата с ограничено желязо се наблюдават на 6 седмици и 4 месеца. След 4 месеца най-силните предсказатели за нисък статус на желязо бяха мъжете и висок процент на наддаване на тегло от раждането.

заключение:

При кърмачета с биохимични признаци на нарушена функция на кобаламин добавката не подобрява броя на хематологичните клетки. Промените в параметрите на еритроцитите изглежда са свързани главно със състоянието на желязо в тази възрастова група.

Основното

Кърменето е период, характеризиращ се с бърз растеж с повишени нужди от няколко микроелемента и последващ риск от недохранване (1). Съобщава се, че при предимно кърмените бебета дефицитът на желязо и кобаламин преобладава (1, 2). Докато дефицитът на желязо се счита за основна причина за анемия при кърмачета (3), дефицитът на кобаламин се характеризира предимно със забавяне на развитието в тази възрастова група (2, 4). Съобщава се, че бебетата с маргинален дефицит на кобаламин имат нормални хематологични стойности (5, 6), а панцитопенията и макроцитната анемия са наблюдавани главно при тежък и дългосрочен дефицит на кобаламин (2).

Оценката на храненето на бебетата може да бъде трудна поради обширните физиологични промени, които настъпват през първите месеци от живота, което усложнява интерпретацията на нормалните лабораторни параметри (2, 7). Серумният кобаламин намалява значително през първите седмици и остава нисък през първите 6 месеца, докато серумният фолат се увеличава и остава висок през първата година от живота (8). Тези промени са придружени от увеличаване на метаболитните маркери на общия хомоцистеин (tHcy) и метилмалонова киселина (8). Добавката на кобаламин променя всички признаци на нарушен кобаламин към профила, наблюдаван при по-големи деца и възрастни с репликация на кобаламин, което предполага, че високите нива на tHcy и метилмалонова киселина, съобщени при голяма част от кърмачетата предимно с кърма, не отразяват незрял метаболизъм, а по-скоро лошо съжителство. -зависими реакции (9).

Скоростта на синтез на хемоглобин и образуване на еритроцити намалява драстично през първите дни след раждането и достига пикове през втората седмица от живота. Поради потисната еритропоеза и намалената жизнеспособност на феталните еритроцити (60–70 d), нивото на хемоглобина (Hb) и броят на еритроцитите достигат най-ниските стойности - 2 месеца след раждането (10, 11). Размерът на еритроцитите, определен от средния обем на клетките (MCV), намалява и е най-малък на 6-месечна възраст, след което постепенно се увеличава (10). Докато общите параметри на червените кръвни клетки, като нивата на Hb и MCV, отразяват средните стойности на популацията на еритроцитите със средна жизнеспособност от 120 d, съдържанието на ретикулоцитен хемоглобин (CHr) осигурява оценка в реално време на еритропоезата през предходните 24– 48 часа (12). Това предимство прави CHr полезен в периоди на бързи физиологични промени и се смята, че CHr е най-добрият предиктор за дефицит на желязо при кърмачета и превъзхожда традиционните параметри на желязото като серумен феритин и насищане на трансферин (7).

Преди това проведохме рандомизирано контролирано проучване с кобаламин при предимно кърмени бебета на възраст 6 седмици с биохимични признаци на нарушена функция на кобаламин (9). В тази статия отчитаме ефекта от добавката на кобаламин върху хематологичните параметри при деца след 4 месеца. Целта на това проучване е да се изследва дали метаболитният профил, показващ нарушена функция на кобаламин, е свързан с хематологичното производство на клетъчни линии през първите месеци от живота.

резултатът

Демография и хранене

Изследваната група включва 107 здрави 6-седмични деца, 56 момчета (52%), родени в срок (средна гестационна възраст 39,9 (SD 1, 3) t.), С тегло, подходящо за гестационната възраст (средно 3,578 (SD 506 ) ж). Не са открити значителни разлики между кобаламин и контролната група според демографските характеристики на бебетата и майките при записване и проследяване (P> 0,05), а данните за цялата група са дадени в в таблица 1 . Използвани са два различни вида млечен състав, обогатен с желязо (0,7-0,8 mg на 100 ml възстановено мляко) и кобаламин (0,13-0,2 μg на 100 ml възстановено мляко). Използвани са различни видове суспензия, всички обогатени с желязо (4, 8 - 11, 1 mg на 100 mg прах). Нито едно дете не получи допълнително желязо.

Маса в пълен размер

Средното процентно увеличение на теглото от раждането е 39% (SD 14%) на 6 седмици и 95% (SD 26%) на 4 месеца. Корелацията на Спиърман е увеличение на процентното тегло на 6 седмици (r = -0, 44, P 0,06) и не се наблюдават значителни разлики в процентното наддаване на тегло или диетата.

Средната възраст на майките е била 31,5 години (SD 4, 8) y. И 63 от 104 майки са били много деца и са имали средно 1,4 деца (диапазон: 1-4). Ежедневна употреба на добавки с желязо за по-кратки или по-дълги периоди по време на бременност е съобщена от 38 от 104 майки. Две от майките са вегетарианци, а други казват, че са имали всеобхватна диета, въпреки че девет майки казват, че рядко или никога не ядат месо (n = 6) или риба (n = 3).

Състояние на кобалтин и фолиева киселина за новородени

Публикувано е подробно описание на състоянието на кобаламин и фолиева киселина (9). След 6 седмици средното ниво на серумен кобаламин е 170 (134–255) pmol/l, а средното ниво на tHcy в плазмата е 7,59 (6, 21–9, 28) μmol/l; не са наблюдавани значителни разлики в нивата на витамин и метаболит между кобаламин и контролната група. След 4 месеца групата на кобаламин има 75% по-високо средно ниво на серумен кобалин в сравнение с контролната група и средното ниво на tHcy намалява с 39%, но остава непроменено в контролите, което показва метаболитен отговор на добавките с кобаламин.

Хематологични параметри на кърмачета

Средните нива на Hb, MCV и CHr намаляват от 6 седмици на 4 месеца, докато средният брой и на трите клетъчни линии се увеличава; не наблюдавахме значителни разлики между кобаламин и контролната група ( таблица 2 ). Също така не наблюдавахме ефекта от добавката на кобаламин върху хематологичните параметри (P> 0, 18 за всички параметри, данните не са показани), използвайки модел на многократна линейна регресия, който включваше, наред с други неща, пол, процентно наддаване на тегло, хранене и употреба на майчините хранителни добавки. ( Таблица 3 ). След 4 месеца основните детерминанти на хематологичните параметри са високият процент на постнатално тегло и мъжкият пол, които са свързани с по-нисък статус на желязо, определен от MCV и CHr ( таблица 3 ). Не са наблюдавани значими предиктори при нивата на Hb след 4 месеца. Представените общи адитивни модели на дозозависими промени, показани за CHr и MCV с процентно увеличение на теглото, са показани в Фигура 1 . Мъжете са имали значително по-малки еритроцити и по-нисък CHr в сравнение с момичетата на 6 седмици и 4 месеца ( таблица 4 ).

Маса в пълен размер

Маса в пълен размер

Връзката доза-отговор между процентното наддаване на тегло от раждането до 4 месеца с ( а ) съдържанието на ретикулоцитен хемоглобин (CHr) и ( б ) среден клетъчен обем (MCV) след 4 месеца при използване на генерализирани адитивни модели. Кривите доза-реакция са показани с плътни линии с 95% доверителен интервал като пунктирани линии.

Изображение в пълен размер

  • Изтеглете слайд на PowerPoint

Маса в пълен размер

След 6 седмици ретикулоцитозата беше индиректно свързана с нивата на Hb (r =, 0, 62, P 0,06), не бяха наблюдавани значими асоциации. ).

Връзката доза-отговор между ( а ) нива на хемоглобин (Hb), ( б ) среден клетъчен обем (MCV) и ( ° С ) съдържание на ретикулоцитен хемоглобин (CHr) с броя на ретикулоцитите на 6 седмици, използвайки генерализирани адитивни модели. Кривите доза-реакция са показани с плътни линии с 95% доверителен интервал като пунктирани линии.

Изображение в пълен размер

  • Изтеглете слайд на PowerPoint

дискусия

При предимно кърмени, недоносени бебета с биохимичен профил, показващ нарушена функция на кобаламин, добавянето на кобаламин има значителен ефект върху метаболитните маркери на състоянието на кобаламин на 6 седмици (9), но няма ефект върху хематологичните параметри на 4 месеца. Високият постнатален процент наддаване на тегло и мъжкият пол са основните определящи фактори за хематологичните параметри и са свързани с по-нисък статус на желязото. Ретикулоцитозата е свързана с ниски MCV и CHr както през 6 седмици, така и през 4 месеца, което показва съществуването на еритропоеза с ограничена желязо през първите месеци от живота при предимно кърмени бебета.

Формалните ограничения в дизайна на изследването включват липса на заслепяване на изследователи и майки чрез инжектиране на кобаламин и липса на инжектиране на плацебо в контролната група. Ние обаче не считаме тези фактори за важни за хематологичния изход при деца след 4 месеца.

Използвани са микробиологични тестове за определяне на серумен фолат и кобаламин. През последните години често се използват конкурентни тестове за свързване на луминесценция, но микробиологичният анализ все още се счита за златен стандарт за серумен фолат (13). Докато микробиологичният анализ определя биологично активен кобаламин, тестовете за луминесценция с конкурентно свързване също включват функционално неактивни аналози на кобаламин. Последните проучвания показват, че конкурентните свързващи тестове за луминесценция могат да имат широко увреждане, по-специално чрез предоставяне на фалшиви нормални стойности при дефицит на кобаламин (14).

На 4 месеца основното наддаване на тегло след раждането и мъжкият пол са основните фактори, определящи хематологичните параметри, и двете са свързани с по-ниски нива на желязо. Бързият растеж с последващи по-високи хранителни нужди може да създаде проблеми, ако диетата е неоптимална. По-голямата част (70%) от тези бебета са кърмени изключително от раждането си и въпреки че кърмата е богата на енергия, тя е с ниско съдържание на някои хранителни вещества като желязо и витамини D и K (20). Понижени концентрации на желязо и кобаламин в кърмата са докладвани по време на кърмене (21, 22), а продължителното изключително кърмене е свързано с повишен риск от дефицит на кобаламин и желязо (23). Полът на мъжете също е признат рисков фактор за дефицит на желязо при малки бебета (24, 25). Съобщава се, че момчетата имат значително по-ниски нива на MCV и Hb и феритин в сравнение с момичетата през първите 9 месеца от живота (24), но механизмът на тази полова разлика е неизвестен. Разликата между половете може да се обясни отчасти с по-голямото наддаване на тегло при момчетата, което не беше потвърдено в нашето проучване; мъжкият пол и процентното наддаване на тегло изглежда са независими рискови фактори за нисък статус на желязо.

При тези малки деца броят на ретикулоцитите е индиректно корелиран с нивата на Hb и е свързан с ниски MCV и CHr, показателни за еритропоезата с ограничено желязо (26). За разлика от възрастните, при които ниските нива на Hb поради дефицит на желязо обикновено се свързват с нормален или намален брой на еритроцитите (27), висок брой на еритроцитите е наблюдаван при кърмачета на възраст 6-48 месеца с желязодефицитна анемия (28). Ретикулоцитозата, наблюдавана в тази възрастова група, е по-изразена при лека спрямо тежка анемия, което се обяснява с факта, че тежкият дефицит на желязо е свързан с дизеритропоезата, което може да намали броя на оцелелите еритроцити (28).

заключение

При кърмачета с биохимични признаци на нарушение на кобаламина, добавянето на кобаламин на 6 седмици е имало значителен ефект върху вътреклетъчните метаболитни маркери на кобаламиновия статус, но не е имало ефект върху хематологичните параметри след 4 месеца. При тези предимно кърмени бебета високият процент наддаване на тегло и мъжкият пол са основните определящи фактори за хематологичните параметри и са свързани с по-ниски нива на желязо след 4 месеца. По-нататъшни проучвания за състоянието на микроелементите при малки, особено кърмени деца, са оправдани.

методи

Проучване на населението и дизайна

Между декември 2004 г. и април 2006 г. 107 здрави 6-седмични бебета, включително три двойки близнаци и техните 104 майки, бяха приети от местните здравни служби в Берген, Норвегия, и бяха включени в проучване за намеса на кобаламин. Публикувано е подробно описание на методите и резултатите от изследването (9). Налични са хематологични данни за 107 деца на 6 седмична възраст и 102 деца на 4 месечна възраст и тези деца са включени в този анализ.

Въпросникът за хранене на бебета и майки, добавки с витамини, параметри на растеж, паритет и употреба на тютюн беше попълнен на 6 седмици и 4 месеца. Тъй като всички използвани различни видове храни и каши съдържат желязо, храненето на кърмачетата се определя като изключително кърмено спрямо неексклюзивно кърмено, което включва комбинирано кърмене и кърмене, изключително хранене на бебета и всяко от тях в комбинация със солидна диета.

Бебетата са назначени чрез блокова рандомизация на интрамускулно инжектиране на 400 μg хидроксикобаламин (витамин В12 депо; Nycomed Pharma, Asker, Норвегия) (n = 54, група с кобаламин) или без лечение (n = 53, контролна група). Лабораторният персонал, отговорен за събирането и анализа на кръвта, беше ослепен за групово разпределение.

Етично съгласие за протокола е дадено от Регионалния комитет по етика в медицинските изследвания, а майките са дали писмено информирано съгласие. Този тест е регистриран с ClinicalTrials.gov, номер NCT00479479.

Вземане на кръв и биохимичен анализ

Кръвни проби бяха получени на 6 седмици и 4 месеца чрез антеубална венепункция и събрани в EDTA Vacutainer Tubes (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Хематологичните параметри (Hb, MCV, еритроцити, ширина на разпределение на червените кръвни клетки, CHr, левкоцити и тромбоцити) бяха анализирани в рамките на 4 часа с помощта на автоматизиран хематологичен анализатор (ADVIA 120; Bayer Diagnostics, Tarrytown, NY). Налични са ретикулоцитни индекси (ретикулоцити и CHr) за субпопулацията на изследваната популация (n = 62 от 107 на 6 седмици, n = 72 от 102 на 4 месеца и n = 58 от 102 сдвоени данни на 6 седмици и 4 месеца ),

Кръвните проби, използвани за приготвяне на EDTA-плазма, се поставят в ледена вода и плазмата се отделя в рамките на 4 часа. Плазмените нива на tHcy и метилмалонова киселина бяха анализирани чрез газова хроматография-масспектрометрия на базата на дериватизация на метилхлороформиат (29). Серумът се получава чрез изтегляне на кръв в епруветки без вакуум (Becton Dickinson). Серумният кобаламин се определя чрез микробиологичен тест Lactobacillus leichmannii (30), а серумният фолат - чрез микробиологичен тест Lactobacillus casei (31).

Статистически анализ

Резултатите се отчитат като среден и интерквартилен диапазон и средно и SD. Медианите са сравнени от теста на Wilcoxon с подписаната позиция и U-теста на Mann-Whitney, което означава t-тест на Student. Разликите в категориалните променливи бяха тествани с помощта на χ 2 теста .

Корелацията на Спиърман е използвана за оценка на връзката между процентното наддаване на тегло и теглото при раждане и връзката между хематологичните параметри на 6 седмици и 4 месеца. Няколко модела на линейна регресия бяха използвани за оценка на връзките на хематологичните параметри на детето (Hb, MCV и CHr) след 4 месеца с намеса на кобаламин, пол, процентно наддаване на тегло от раждането до 4 месеца, хранене на бебета и употреба на желязо при майката. 6 седмици до 4 месеца.

Графично представяне на дозата-отговор на нивата на Hb, MCV и CHr с броя на ретикулоцитите на 6 седмици и процентното наддаване на тегло с CHr и MCV след 4 месеца са получени при използване на генерализирани адитивни модели.

Обобщените адитивни модели бяха изчислени с помощта на софтуера mgcv-пакет (версия 1.4-1) в R (R Foundation for Statistics Computing, версия 2.8.1; Виена, Австрия) и статистическият пакет SPSS (версия 18) беше използван за останалите статистически анализи . Двустранни стойности P