елементи
абстрактно
Добре известно е, че алогенни трансплантации на костен мозък или PBSC от подходящи хистосъвместими свързани или несвързани донори, прилагани след имуноаблативно или миелоаблативно или миелосупресивно кондициониране, могат да осигурят терапевтичен подход за лечение на пациенти с високорискови форми на ALL и AML и потенциално са лечебни.рискови форми на тези заболявания при първата ремисия. Основното ограничение на ефикасността на тези трансплантации обаче е GVHD, имунният отговор на Т-клетките в присадката на донора срещу алоантигени, които по същество се представят от клетките на лимфо-хематопоетичната система гостоприемник. 3, 4 Остра GVHD с тежест 2-4 и изискваща имуносупресивна терапия се наблюдава при до 40% от свързаните с HLA реципиенти и над 50% от пациентите, трансплантирани с HLA-несвързан костен мозък, независимо от комбинациите на прилагани имуносупресивни лекарства. след трансплантация, за да се избегне това усложнение. Освен това, още 50% от оцелелите ще продължат да развиват хронична GVHD. 7
Техники за изчерпване на Т-клетки за предотвратяване на GVHD
Ролята на Т-клетките в патогенезата на GVHD е изяснена за пръв път при H2 несъвместими модели на мишки. Първоначални директни демонстрации на потенциала на изчерпване на Т-клетките за предотвратяване на GVHD са предоставени от проучвания на смъртоносно облъчени мишки, трансплантирани с H2-несъвместими Т-клетъчно изчерпани клетки от костен мозък и далак, или не успявайки да се развият след неонатална тимектомия 8 или от антитела изчерпващи лектина Т-клетки от популации. Такива трансплантации могат да имплантират и възстановят хематопоезата и имунитета без индукция на остра GVHD.
От въвеждането на този подход са оценени няколко различни метода за изчерпване на Т-клетки, включително техники, използващи няколко различни миши моноклонални антитела, насочени срещу специфични за Т-клетките антигени. Повечето от тези техники постигат 1,5-2 log изчерпване на изчерпването на Т-клетките и изискват пълна профилактика на GVHD след профилактика след трансплантация. Специфичното за CD52 моноклонално антитяло Campath постига изчерпване на Т-клетките от 2, 5 до 3 Log и е било използвано или in vivo, или in vitro за изчерпване на Т-клетките. Този подход значително намалява GVHD при сдвоени сдвоявания донор-реципиент, но има променлив успех в предотвратяването на GVHD при различни HLA реципиенти. 16 За разлика от тях, соевият лектин, техника за изчерпване на Е-розетка, която последователно намалява Т-клетките с поне 3 лога 10, а по-скоро разработените техники използват положителна селекция на CD34 + родословни клетки от мобилизирани от G-CSF левкоцити от периферна кръв, които достигат 4 –4. Изчерпването на Log 10 Т-клетки е приложено на HLA-съвпадащи или заблудени получатели без профилактика след трансплантация и е ефективно за радикално намаляване на честотата на тежки остри и хронични GVHD. 17, 18, 19
Маса в пълен размер
Т-клетъчно изчерпана трансплантация като платформа за приемни имунотерапии
Разработването на техники за изчерпване на Т-клетки от алогенни трансплантации на хемопоетични клетки, които елиминират необходимостта от имуносупресия след трансплантация за предотвратяване на GVHD, също предостави уникална платформа за изследване на приемащите Т-клетъчни терапии. При липса на имуносупресивни лекарства прехвърлените Т клетки могат да се размножават и да функционират без екзогенно инхибиране. Пациентите в ранна трансплантация също са подчертано лимфопенични, което позволява хомеостатична пролиферация на адоптивно прехвърлени Т клетки до нива, по-високи от тези, постижими при пациенти с нормална популация от лимфоцити.
Понастоящем нашата трансплантационна програма оценява приемната имунотерапия с трансплантирани донорни ефекторни Т клетки по две показания: (1) лечение или профилактика на рецидиви на хематологични злокачествени заболявания; и (2) лечение на резистентни към лекарства вирусни инфекции.
При лечението и профилактиката на рецидив след трансплантация, ние извършваме in vitro проучвания, оценяващи разширени Т-клетки и специфични за донора Т-клетки, специфични за WT-1 протеинови пептидни епитопи при пациенти с хематологични злокачествени заболявания на WT-1 +, по-специално AML напреднали форми на MDS и миелом. В допълнение, ние инициирахме проучвания на EB-специфични Т-клетки, трансдуцирани с трансдуцирани транс-дарени трансплантационни донори, които експресират специфичен за CD19 химерен антигенен рецептор за лечение на рецидиви на CD19 + В-клетъчна линия ALL и неходжкинов лимфом. Тъй като нашият и други центрове вече са публикували няколко доклада за клиничната активност на Т-клетките, трансдуцирани да експресират специфичен за CD19 CAR, ще се съсредоточа върху нашите изследвания на Т-клетки, специфични за WT-1.
През последните 3 години анализирахме специфични за WT-1 Т-клетки, генерирани от над 100 нормални трансплантационни донори чрез in vitro сенсибилизация с автоложни дендритни клетки, получени от моноцити, заредени с набор от припокриващи се 15-мерни пептиди, обхващащи WT-1 протеинова последователност. Към днешна дата ние идентифицирахме 41 неотчетени досега имуногенни епитопи и техните представящи алели от HLA клас и демонстрирахме, че тези Т-клетки, специфични за HLA I или II ограничени епитопи, селективно лизират WT-1 + левкемични клетки, получени от пациент от същия индивид. 47
Нашите изследвания I. и II. Фазите на приемна имунотерапия на вирусни заболявания при реципиенти на НСТ са фокусирани върху терапевтичния потенциал на вирус-специфични Т-клетки при (1) пациенти с патологично документирани EBV + лимфоми, особено при пациенти, които не са отговорили на Rituxan и (2) пациенти с явна CMV заболяване или персистираща виремия, устойчиви на най-малко 2 седмици конвенционална антивирусна терапия. Т-клетките, използвани в нашите първоначални проучвания, са получени от донора на всеки от пациентите, които са трансплантирани хемопоетични клетъчни трансплантати. Т-клетки, изолирани от РВМС на всеки донор, се култивират in vitro в продължение на 28 до 35 дни след сенсибилизация или с облъчени автоложни донорски В-клетки, трансформирани с EBV щам B95.8 за EBV-специфични Т-клетки, 53 или автоложни дендритни клетки, пълни с пул от припокриващи се 15-мерни пептиди, обхващащи CMVpp65 последователността за CMV-специфични Т клетки. In vitro културата през този период от време не само избира имунодоминантни Т-клетки, специфични за вируса, но също така и делеции на алоактивни Т-клетки, потенциално способни да индуцират GVHD.
Резултатите от тези проучвания предоставят доказателства в подкрепа на потенциала на този подход. Първо, три седмични T-клетъчни инфузии са безопасни, без остра токсичност или случаи на остра или хронична GVHD ден или треска на съществуваща GVHD при дози 1-2 × 106 специфични за вируса Т-клетки/kg/доза., те са били ефективни при отстраняване на EBV лимфоми и CMV инфекции, които са се провалили с конвенционални терапии, индуцирайки персистиращи CRs при 68% от пациентите с EBV лимфом, които не са отговорили на Rituxan, 53 и повече от 86% от пациентите с CMV инфекция или персистиращи. виремия, която не се повлиява от ганцикловир, фоскарнет и/или цидофовир. 55
Ограничения поради имуноминиране на CM-специфични Т-клетки, в този случай Т-клетки, специфични за CMVpp65 пептиди, представени от HLA B0702.
Изображение в пълен размер
Тъй като CMV инфекциите засягат предимно тъкани на гостоприемника, CMV инфекциите също се свързват с 3 пъти по-висока честота на смъртност при реципиенти на трансплантирани трансплантанти на HLA трансплантати 59, отколкото се наблюдава при подобно кондиционирани TLA трансплантирани клетки с идентични HLA T клетки. ние изследвахме дали ограниченията на имунодоминантния, HLA-ограничен Т-клетъчен отговор може да са фактор, допринасящ за тази по-висока честота на животозастрашаващи CMV инфекции. Очаква се Т-клетъчно изчерпаните присадки, които обикновено прехвърлят 2-20x103 зрели Т-клетки/кг на гостоприемника, да прехвърлят съвместно само малък брой специфични за вируса имунодоминантни CTL прекурсори, които се откриват при честоти 1/10 3 - 1/10 4 Т-клетки в кръвта на латентно заразени серопозитивни донори. Всъщност, нашите предварителни резултати показват, че CMVpp65-специфични Т-клетки, генерирани от HLA-хаплотип-несъвместими донори, могат да бъдат ограничени до HLA алели, които не се споделят от домакина в до половината от случаите, и че тежкото заболяване се среща почти изключително в тази фракция бенефициенти. 61
За справяне с тези ограничения и за по-ефективен контрол на пост-трансплантационните вирусни инфекции, както при реципиенти на HLA с изчерпване на HLA-клетки, така и при пациенти, получили HLA трансплантации, които са частично идентични с кръв от пъпна връв или сдвоени костни мозъци или трансплантации на PBSC от серонегативни донори., нашата група изследва използването на HLA частично съответстващи Т-лимфоцити, специфични за трети донори, по-рано характеризирани като тяхната епитопна специфичност и HLA ограничение.
В заключение, алогенните HCT силно изчерпани Т-клетки и приложени след поносима миелоаблативна химиотерапия могат да осигурят последователно придържане и по-ниска честота на остри и хронични GVHD без увеличаване на рецидива при пациенти, трансплантирани за остра левкемия. Такива трансплантации осигуряват обещаваща платформа за туморни и патоген-специфични клетъчни имунни терапии. Приемащото предаване на реактивни на левкемия Т клетки може да предизвика ремисии при пациенти, които рецидивират след трансплантация и понастоящем се оценяват за предотвратяване на рецидив на заболяването. Адоптивен трансфер на специфични за вируса Т клетки, генерирани от донор на трансплантация или избран от донор на трета страна, също може да предизвика трайни ремисии на EBV лимфоми и резистентна на лекарства CMV инфекция при висок процент пациенти. Въпреки това, тяхното последователно успешно прилагане към HLA-дисциплинирани реципиенти изисква внимателен подбор на специфични за вируса Т клетки, и двете от които са ограничени от HLA алели, експресирани от заразени клетки и специфични за епитопи, представени от тези алели.